[發明專利]閩浙馬尾杉菌根真菌及其產石杉堿甲的方法和應用

有效

• 申請號: 201410044946.8
• 申請日: 2014-02-07
• 公開（公告）號: CN103834577A
• 公開（公告）日: 2014-06-04
• 發明（設計）人: 吳水生;劉海元;張方方;鄭雅媗
• 申請（專利權）人: 福建中醫藥大學
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14;C12P17/12;C12R1/645
• 代理公司: 福州市鼓樓區博深專利代理事務所(普通合伙) 35214
• 代理人: 林志崢

技術領域

本發明涉及微生物技術領域，具體涉及閩浙馬尾杉菌根真菌及其產石杉堿甲的方法和應用。?

背景技術

老年癡呆癥是一種嚴重的、退行性腦疾患，由于其發病率高，致殘率高，給社會和家庭造成了嚴重的危害和巨大的經濟負擔，隨著社會老齡化，老年癡呆癥發病率相對上升，據統計，世界有5000多萬老年人患有不同程度的老年性癡呆癥，因此治療老年癡呆癥是擺在當前社會的一大難題。?

石杉堿甲[(-)Huperzine?A，Hup?A]是我國科學家劉嘉森于1986年從蛇足石杉中分離得到的一種新型石松類生物堿有效單體。藥理實驗表明，它能抑制乙酰膽堿酯酶活性，有效地改善老年人記憶功能，對治療老年癡呆癥有特殊療效。石杉堿甲主要來源于野生蛇足石杉全草，而該植物對環境要求苛刻，生長緩慢，分布零散，資源更新周期長，而且石杉堿甲在蛇足石杉中的含量甚微，僅為萬分之幾，造成國際市場上石杉堿甲的價格不斷攀升，一度達到每千克50萬美元，成為制約石杉堿甲開發的瓶頸。由于石杉堿甲的結構特殊，骨架中的橋環結構難以人工合成，目前所有化學合成方法步驟復雜、合成條件苛刻、產率很低，難以實現工業化生產；植物組織培養無法消除內在的微生物污染，同時由于植物生長條件十分苛刻，因此至今未能走出實驗室。?

植物-菌根真菌-內生真菌三重互惠共生體，其建立共生體的內在機制是兩種真菌通過營養競爭或通過分泌次生代謝產物來相互抑制與植物建立共生體。目前已有不少關于從蛇足石杉內生真菌代謝產物中分離到石杉堿甲的報道，如專利CN101195804A（黎萬奎等，專利申請號：200610119149.7，內生枝頂孢霉）、CN101240304A(吳東才等，專利申請號：200710003519.5，枝孢霉菌)、CN101942393A(朱篤等，專利申請號：20091010186852.3，竹黃菌)、專利CN103103134A(吳水生等，專利申請號：201110355882.X，炭疽菌)等；楊曉軍?（《內生真菌YD-01次生代謝產物的研究Ⅰ》2006，37（5）：479-480，中國藥科大學學報）均報道了產石杉堿甲及其類似物的內生真菌。以上均表明利用內生真菌發酵生產石杉堿甲成為一種可能，依據該共生體的內在機制從植物根際土壤中可分離到產石杉堿甲的菌根真菌，但目前關于該機制的研究觀點不盡相同且土壤中微生物種類繁多，分離純化工作量大，因此至今關于從植物根際土壤中分離產石杉堿甲菌根菌的研究仍未見報道。?

發明內容

本發明的目的是克服土壤中細菌含量較多，分離純化內生菌根真菌難度較大的缺陷，提供一種供發酵生產石杉堿甲藥物的閩浙馬尾杉菌根真菌及其產石杉堿甲的方法和應用。?

為實現上述目的，本發明的技術方案為提供一種閩浙馬尾杉菌根真菌，命名為裂褶菌（Schizophyllum?commune）MT39，其保藏單位和保藏號為:中國典型培養物保藏中心，CCTCC?M2013642。?

上述的閩浙馬尾杉菌根真菌—裂褶菌MT39，其顯微形態為：菌絲棉花狀，有隔，分枝，不產孢子。?

上述的閩浙馬尾杉菌根真菌—裂褶菌MT39，其基因組ITS特征堿基序列如SEQ?ID?NO：1所示。?

上述的閩浙馬尾杉菌根真菌—裂褶菌MT39，其菌落培養特征為：PDA培養基28℃培養，轉速為140rpm，培養第二天開始出現菌絲球，第五天菌絲球直徑變大，發酵液變粘稠，發酵液開始變淡黃色，第九天顏色變深，發酵液變得非常粘稠，其菌落形態為：正面白色，菌絲發達，細膩，背面黃白色。?

本發明的另一技術方案為提供一種閩浙馬尾杉菌根真菌，命名為(Chaunopycnis?alba)MT78，其保藏單位和保藏號為:中國典型培養物保藏中心，CCTCC?M2013643。?

上述的閩浙馬尾杉菌根真菌—MT78，其顯微形態為：菌絲分枝，無隔，孢子梨形，單胞。?

上述的閩浙馬尾杉菌根真菌—MT78，其基因組ITS特征堿基序列為:SEQ?ID??NO：2。?

上述的閩浙馬尾杉菌根真菌—MT78，其固體培養菌落特征為：PDA培養基28℃培養，轉速為140rpm，第三天明顯生長大量菌絲呈顆粒狀，第五天發酵液變無色粘稠狀液體，第九天菌絲集結成團。其菌落形態為：正面白色，菌絲細小，呈薄膜狀，有葉脈狀凸起，呈放射狀，背面呈脈狀放射裂紋，黃白色。?

本發明的又一技術方案為提供一種閩浙馬尾杉菌根真菌制備石杉堿甲的方法，包括下列步驟：?