[發明專利]一種鑒別連翹衍生品的方法

有效

• 申請號: 201410044108.0
• 申請日: 2014-01-30
• 公開（公告）號: CN103808749A
• 公開（公告）日: 2014-05-21
• 發明（設計）人: 董建軍;張海艷;趙天增;郭唯;李曉;陳玲;范毅;常霞;王建軍;魏悅;李倩
• 申請（專利權）人: 河南省科高植物天然產物開發工程技術有限公司
• 主分類號: G01N24/08
• 分類號: G01N24/08;G01N30/06;G01N30/88
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司 11002
• 代理人: 王文君

技術領域

本發明屬于天然藥用植物的鑒別領域，具體地，涉及一種鑒別連翹衍生品的方法。

背景技術

連翹是中國臨床常用傳統中藥之一，為木犀科（Oleaceae）連翹屬（Forsythia）植物連翹（Forsythia?suspensa（Thunb.）Vahl）的干燥果實，果實初熟尚帶綠色時采收稱為青翹，果實熟透顏色發黃時采收稱為老翹。連翹歸肺、心、小腸經，藥性微寒，味苦，具有清熱解毒、消腫散結、疏散風熱的功效[國家藥典委員會.中華人民共和國藥典2010年版一部.中國醫藥科技出版社，159.]。其活性成分主要為木脂素類和苯乙醇苷類化合物，具有抗病毒、抗炎、抗菌、抗氧化、降血酯、保肝等作用[王金梅，等.天然產物研究與開發2007，19:153.]。

定性鑒別上述某類成分或定量測定其某種活性成分含量，已成為評價連翹衍生品質量的重要方法（例如中國藥典2010版是對連翹衍生品中木脂素類成分連翹苷和苯乙醇苷類成分連翹酯苷進行定性和定量分析）；這種針對單一成分進行定性、定量分析的質量檢測模式不能有效控制中藥提取物的內在質量，無法滿足當前對于客觀有效地評價和控制連翹及其制劑質量的迫切要求。

指紋圖譜是目前國際公認的控制中藥或天然藥物質量最有效的方式之一。人們憑借實用的指紋圖譜不僅可確認該產品的真偽，同時能判斷其穩定性。目前，連翹衍生品的木脂素和苯乙醇苷類化合物的指紋圖譜研究工作，集中在HPLC指紋圖譜[①[國家藥典委員會.中華人民共和國藥典2010年版一部.中國醫藥科技出版社，381.②孫國祥,等.中成藥2007,29(2):161.]、毛細管電泳指紋圖譜（HPCE法）[孫國祥,等.色譜2006,24(2):196.]、高效液相色譜-質譜聯用法（LC-MS）[Qu?HH,et?al.MICROCHEMICAL?JOURNAL,2008;89(2):159]等。其中主流方法HPLC指紋圖譜由于受非色譜條件（如色譜柱內徑、長度、固定相牌號、載體粒度、流動相流速、混合流動相各組分比例、柱溫、進樣量、檢測器靈敏度等）影響較大和需用標準品等等原因，重復性和可行性均存在許多局限性；HPCE法雖以其高效、快速、簡便且柱不易受污染而優于HPLC法，但仍存在重現性較差、線性范圍窄和靈敏度較低等不足；單一LC-MS分析方法由于中藥復方的復雜性和缺乏標準品的現狀，MS還有離子化程度和基質干擾等問題，通常不足以對多種成分進行準確的結構定性。

IGD核磁共振碳譜偶聯（IGD¹³C?NMR?coupling）指紋圖譜技術，也叫反門控去偶核磁共振碳譜偶聯指紋圖譜技術，該技術是在已研究多年的核磁共振氫譜（¹H?NMR）指紋圖譜技術[趙天增，等.¹HNMR指紋法鑒定植物中藥，中草藥2000，31(11)：868-870]的基礎上聯合其他技術（例如目前應用最廣泛的高效液相（HPLC）指紋圖譜技術[謝培山等，中藥色譜指紋圖譜，人民衛生出版社，2005]）提出的一種新的非單一手段綜合指紋圖譜技術。目前為止，對于連翹衍生品及相關產品，并未見用IGD核磁共振碳譜偶聯指紋圖譜技術進行鑒別的報道和技術內容的披露。

連翹衍生品的品質不在于某個單一成分，其療效是多個成分協同配比的結果。因此，建立不僅能控制連翹衍生品活性成分，而且能控制這些活性成分之比例的IGD核磁共振碳譜偶聯指紋圖譜勢在必行。連翹衍生品核磁共振碳譜偶聯指紋圖譜的研究與應用，不僅可以解決我國連翹衍生品評價的難題，也為加強連翹衍生品內在成分研究的系統化與標準化，實現與國際接軌提供了科學的保證。隨著該技術在其他中藥提取物中的推廣應用，該技術的重大科學價值必將日趨突出。

發明內容

為了解決現有技術的問題，本發明的目的是提供一種鑒別連翹衍生品的方法。

為了實現上述目的，本發明提供的鑒別連翹衍生品的方法，包括以下步驟：

1）取連翹衍生品直接作為含有活性成分組（連翹木脂素和苯乙醇苷）的連翹木脂素和苯乙醇苷特征提取物；

2）對所述連翹木脂素和苯乙醇苷特征提取物進行IGD核磁共振碳譜指紋圖譜檢測，根據指紋圖譜得到連翹木脂素和苯乙醇苷特征提取物中若干個活性成分特征峰峰強度；并用相同方式（IGD核磁共振碳譜指紋圖譜）測定出所述各活性成分相應標準參照品的特征峰峰強度；

3）通過定量分析手段得到所述標準參照品的絕對含量；