[發明專利]一種檢測TERT單核苷酸多態性的方法

無效

• 申請號: 201410042839.1
• 申請日: 2014-01-28
• 公開（公告）號: CN103923976A
• 公開（公告）日: 2014-07-16
• 發明（設計）人: 吳松;蔡志明
• 申請（專利權）人: 吳松;蔡志明
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 深圳市合道英聯專利事務所(普通合伙) 44309
• 代理人: 廉紅果;謝成毅

1.一種檢測TERT單核苷酸多態性的方法，包括下述步驟：

(1)、從樣本的尿液和正常組織中分別提取DNA；

(2)、針對需要檢測的突變位點的不同，以從樣本尿液和正常組織中提取的DNA為模板，分別以與突變位點相對應的引物對P1、P2或P3為引物，進行TaqMan?Probe?Real?time?PCR擴增，其中與1,295,228G>A突變位點對應的引物對P1為：

P1Fm:CGGGTCCCCGGCCCAGCCCCT，

P1Rm:GCGCCGCGAGGAGAGGGCG；

P1Fn:CGGGTCCCCGGCCCAGCCCCC，

P1Rn:GCGCCGCGAGGAGAGGGCG；

與1,295,250G>A突變位點對應的引物對P2為：

P2Fm:CGCCCCGTCCCGACCCCTT，

P2Rm:CGCCGCGAGGAGAGGGCG；

P2Fn:CGCCCCGTCCCGACCCCTC，

P2Rn:CGCCGCGAGGAGAGGGCG；

與1,295,242-1,295,243GG>AA突變位點對應的引物對P3為：

P3Fm:CGTCCCGACCCCTCCCGGGTTT，

P3Rm:GCGCCGCGAGGAGAGGGCG；

P3Fn:CGTCCCGACCCCTCCCGGGTCC，

P3Rn:GCGCCGCGAGGAGAGGGCG；

(3)、確定△Ctu與△Ctn之間的大小，當△Ctu-△Ctn<0尿液樣品中存在突變位點；△Ctu-△Ctn≥0尿液樣品中不存在突變位點；其中△Ctu為尿液樣品中突變引物與正常引物達到擴增閾值時的循環數的差值；△Ctn為正常組織樣品中突變引物與正常引物達到擴增閾值時的循環數的差值。

2.根據權利要求1所述的一種檢測TERT單核苷酸多態性的方法，其特征在于，所述TaqMan?Probe?Real?time?PCR擴增的反應條件為：

第一步預變性：95℃30秒，重復1次；

第二步PCR反應：95℃5秒和60℃30秒，重復40次。

3.根據權利要求1所述的一種檢測TERT單核苷酸多態性的方法，其特征在于，所述TaqMan?Probe?Real?time?PCR擴增體系中含有：12.5μl2×Premix?Ex?Taq、0.5μl?PCR?Forward?Primer(10μM)、0.5μl?PCR?Reverse?Primer(10μM)、1μlProbe、2μl?DNA模板和8.5μl?d?H₂O(滅菌蒸餾水)。

4.根據權利要求1所述的一種檢測TERT單核苷酸多態性的方法，其特征在于，所述TaqMan?Probe?Real?time?PCR擴增的反應TaqMan?Probe序列為：

5’-CTCCCAGCCCCTCCCCTTCCTTTCCGCGGC-3’。