[發明專利]一種生產人紅細胞的方法無效
| 申請號： | 201410042250.1 | 申請日： | 2014-01-28 |
| 公開（公告）號： | CN103740642A | 公開（公告）日： | 2014-04-23 |
| 發明（設計）人： | 婁彩玲 | 申請（專利權）人： | 婁彩玲 |
| 主分類號： | C12N5/078 | 分類號： | C12N5/078;C12N5/0735 |
| 代理公司： | 北京超凡志成知識產權代理事務所(普通合伙) 11371 | 代理人： | 吳開磊 |
| 地址： | 201315 上海市浦東*** | 國省代碼： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 生產 紅細胞 方法 | ||
1.一種生產人紅細胞的方法，其特征在于，包括以下步驟：
（a）將購入的帶有CD34標記的人胚胎干細胞擴增培養；
（b）將擴增培養的帶有CD34標記的人胚胎干細胞接種至鋪有骨髓細胞系S17的培養皿，培養至細胞由扁平變圓；
（c）將得到的細胞進行分選得到未脫核的人紅細胞；
（d）將未脫核的人紅細胞進行三維培養至成熟，得到脫核的人紅細胞。
2.根據權利要求1所述的一種生產人紅細胞的方法，其特征在于，該方法中的培養基均為干細胞基礎培養基；
所述干細胞基礎培養基具體成分為：DMEM培養基中加入15%的2%人血白蛋白，1mM丙酮酸鈉，甘氨酸、丙氨酸、脯氨酸、酪氨酸各為0.1mM,2mM谷氨酰胺，0.1mM巰基乙醇，1L?DMEM培養基加入1×106U青霉素和1×106U鏈霉素。
3.根據權利要求2所述的一種生產人紅細胞的方法，其特征在于，該方法中培養條件均為溫度37℃，5%CO2，培養濕度為40%-70%。
4.根據權利要求3所述的一種生產人紅細胞的方法，其特征在于，該方法中均以5%-10%的接種量進行培養，接種的細胞濃度為4.0×106個/ml～9.0×106個/ml。
5.根據權利要求4所述的一種生產人紅細胞的方法，其特征在于，在所述步驟（a）中，所述擴增培養具體為將帶有CD34標記的人胚胎干細胞生長至對數生長期。
6.根據權利要求5所述的一種生產人紅細胞的方法，其特征在于，在所述步驟（a）中，培養時間為24-72h。
7.根據權利要求1所述的一種生產人紅細胞的方法，其特征在于，在所述步驟（b）中，所述鋪有骨髓細胞系S17的培養皿為培養皿底面鋪上一層骨髓細胞系S17。
8.根據權利要求7所述的一種生產人紅細胞的方法，其特征在于，在所述步驟（b）中，培養24-34h時細胞由扁平變圓。
9.根據權利要求1所述的一種生產人紅細胞的方法，其特征在于，在所述步驟（c）中，所述分選采用流式細胞儀。
10.根據權利要求1所述的一種生產人紅細胞的方法，其特征在于，還包括將脫核的人紅細胞進行冷凍干燥后于-4℃保存。
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