[發明專利]一種油棕葉片掃描電鏡樣品制備方法

無效

• 申請號: 201410037752.5
• 申請日: 2014-01-26
• 公開（公告）號: CN103760000A
• 公開（公告）日: 2014-04-30
• 發明（設計）人: 曹紅星;馮美利;劉勇;鄭雪芳;雷新濤
• 申請（專利權）人: 中國熱帶農業科學院椰子研究所
• 主分類號: G01N1/28
• 分類號: G01N1/28
• 代理公司: 海口翔翔專利事務有限公司 46001
• 代理人: 莫臻

技術領域

本發明屬于顯微觀察樣品技術領域，涉及一種掃描電鏡樣品的制備方法，具體是一種油棕葉片掃描電鏡樣品制備方法。

背景技術

油棕（Elaeis?guineensis?Jacq.）屬棕櫚科的單子葉多年生木本油料作物，是世界上生產效率最高的產油植物，平均每公頃年產油量高達4.27t，是花生的5～6倍、大豆的9～10倍，有“世界油王”之稱。油棕作為一種新興的、潛力巨大的熱帶優良，將在食用油的供給方面發揮重要的作用，開發利用前景廣闊。現今我國的油棕品種都是從國外引進的，對其在我國的適應性難以確定，需要經過長期的引種試種觀察，才能確定能否在我國生產上應用，因此，開展油棕種質資源鑒定評價，對種質資源的創新利用至關重要。葉片解剖結構鑒定常作為評價植物適應性強弱的重要手段。

目前在油棕葉片解剖結構方面的研究主要通過石蠟切片的方法制成薄片，用于對其解剖結構的顯微觀察，但是通過石蠟切片制作的薄片僅能觀察葉片的基本結構，而對油棕葉片表面的氣孔分布狀況、氣孔的大小、葉片表面的紋路、表皮細胞垂周壁的樣式等超微結構的觀察和區別尚不能通過石蠟切片獲得，不能夠為種質資源的鑒定提供更為直接可靠、直接和穩定的證據，不利于油棕種質資源的鑒定和分類工作的開展。

發明內容

本發明的目的是針對現有技術的不足而提供一種油棕葉片掃描電鏡樣品制備方法，通過脫水、干燥、鍍膜等工藝，制備的掃描電鏡樣品結構完整，掃描電鏡觀察時葉片表面結構清晰完整，圖像立體感強，有利于開展油棕超微結構的觀察和研究，對于獲得優良種質資源類型，培育或篩選適合我國栽培的種質資源類型或品種具有重要的意義。

本發明所采用的技術方案：

一種油棕葉片掃描電鏡樣品制備方法，其步驟如下：

1、固定液配制：取酒精、冰醋酸、甲醛按標準方法配制獲得FAA固定液。

2、材料前處理：取油棕葉片，洗凈擦干后迅速用刀片切取葉片中部、中脈兩側1cm×1cm的小段樣品，洗凈，再用FAA固定液固定，4℃保存24h，取出用純水漂洗后，用于下一步的脫水。

3、脫水：分別用30%、50%、70%、80%、90%、100%乙醇溶液進行梯度脫水，各20min。

4、干燥：將樣品進行冷凍干燥36小時后，放入干燥器內待用。

5、樣品臺準備：在金屬樣品臺上貼好鍍碳導電膠布，把干燥好的樣品修剪出4mm×3mm的平整小段，順序依次貼在導電膠布上。

6、樣品鍍膜：將干燥好的樣品用離子濺射鍍膜儀電流15mA噴金200s，在樣品表面均勻鍍上一層厚度為l0～50nm的金膜，得到掃描電鏡樣品，可在掃描電子顯微鏡下觀察。

所述冷凍干燥的溫度在-45℃以下。

把制得的掃描電鏡樣品，用S—3000N（HITACHI）掃描電鏡進行觀察，圖像模式為SE，束流38nA，工作距調到13mm，樣品臺傾斜度為0，亮度對比度為自動加手動，焦距為手動。加速電壓為12KV，放大倍數為100-3000倍。觀察到的葉片表面結構清晰，完整，立體感強，在低倍下能看到規律的氣孔排列狀況，高倍下可以看到表皮細胞的紋路和氣孔的形態。

本發明操作步驟簡便，制備的掃描電鏡樣品結構完整，掃描電鏡觀察時圖像立體感強、葉片表面結構清晰完整，成本低，有利于開展油棕超微結構的觀察和研究，對于獲得優良種質資源類型，培育或篩選適合我國栽培的種質資源類型或品種具有重要的意義。

附圖說明

圖1是本發明所提供的掃描電鏡樣品圖像（200X）。

圖2是本發明所提供的掃描電鏡樣品圖像（500X）。

圖3是本發明所提供的掃描電鏡樣品圖像（2000X）。

圖4是本發明所提供的掃描電鏡樣品圖像（3000X）。

具體實施方式

下面結合實施例，對本發明的具體實施方式作進一步詳細描述。以下實施例用于說明本發明，但不用來限制本發明的范圍。下列實施例中未注明具體條件的實驗方法,通常按照常規條件,或按照制造廠商所建議的條件。

實施例

1、固定液配制：以70%酒精90ml+冰醋酸5ml+甲醛5ml的體積比獲得FAA固定液。