[發明專利]應用逆向免疫層析反應的定量檢測方法及試劑盒和外部設備

有效

• 申請號: 201410036880.8
• 申請日: 2014-01-26
• 公開（公告）號: CN103760338A
• 公開（公告）日: 2014-04-30
• 發明（設計）人: 陳功祥;趙培潔;厲永綱
• 申請（專利權）人: 杭州海士利生物科技有限公司;杭州創新生物檢控技術有限公司
• 主分類號: G01N33/558
• 分類號: G01N33/558
• 代理公司: 杭州新源專利事務所(普通合伙) 33234
• 代理人: 李大剛

技術領域

本發明涉及一種應用逆向免疫層析反應的定量檢測方法及試劑盒和外部設備，特別是一種應用逆向免疫層析反應的定量檢測方法及試劑盒和外部設備及其所用的試劑盒和外部設備。

背景技術

目前，對于生物樣本的檢測方法很多，其中IDEXX公司使用了一種特制的試劑盒，它將洗液和顯色液存儲于試劑盒中，洗液和顯色液的上方設置層析膜。它的具體工作原理（以牛奶檢測為例）是：在將牛奶樣本放入試劑管中加熱5分鐘（45℃）后，滴入試劑盒中，層析膜利用毛細現象將牛奶樣本層析移動至層析膜上的檢測點和對照點，使牛奶樣本與檢測點和對照點內的物質發生反應，然后觀察牛奶樣本層析到一定位置（檢測窗處）后，將試劑盒的一側按下，由于試劑盒的這一側上設有兩根分別連接洗液池與層析膜及顯色液池與層析膜的毛細管，所以試劑盒一側按下后，毛細管刺穿密封的洗液池和顯色液池，并將洗液和顯色液吸至層析膜處，然后進行層析移動至檢測點和對照點，對檢測點和對照點進行洗脫和顯色，最后觀察檢測點和對照點的顏色即可得出檢測結果。其試劑盒的結構如圖1所示。

但是這中試劑盒由于存儲了洗液和顯色液，且內部結構較為復雜，因此體積較為龐大，攜帶不便。另外，由于一般洗液和顯色液需要保持較低的溫度，試劑盒在長途運輸過程中始終需要冷藏保存，其運輸成本較高。而且，由于每個試劑盒內的洗液和顯色液的需要實現封裝在試劑盒內，其用量必須統一才可便于大規模生產，為了使其能適應絕大多數樣本的檢測，洗液和顯色液的封裝量一般需大于實際使用量，所以會造成很大的浪費。另外，由于該方案基本都是利用層析膜自身的毛細作用使液體進行流通，所以試劑盒對層析膜的要求較高，需要其內部具有足夠多的毛細管，且保存中需避免受潮。因此IDEXX公司所用的層析膜一般也是特制的，其生產成本及保存成本較高。更值得一提的是，該方案只能定性檢測樣本，不能輸出定量結果，所以只能判定陰性陽性，不能輸出確定的濃度值。

發明內容

本發明的目的在于，提供一種應用逆向免疫層析反應的定量檢測方法及試劑盒和外部設備。它可以解決現有技術中存在的試劑盒無法輸出定量結果、攜帶不方便、運輸成本和保存成本高、及洗液和顯色液浪費等問題。

本發明的技術方案：應用逆向免疫層析反應的定量檢測方法，其特點是：使用外部設備和試劑盒對待測樣本的反應量和反應時間進行精確控制，從而實現逆向免疫層析反應；該劑盒內設有層析膜，層析膜中部載有對照區域和檢測區域；當外部設備檢測到樣本層析到達指定位置，樣本層析完成，自動控制外部設備將洗液和顯色液或發光液先后注入試劑盒，外部設備控制吸液泵作用于試劑盒，使注入的液體進行逆向層析，并先后與對照區域和檢測區域內的物質進行反應（免疫反應和/或化學反應），并最后產生顏色變化或產生可見光，最后外部設備通過識別對照區域和檢測區域的光信號，并將對照區域和檢測區域的光信號以及內置的標準曲線進行對比后即可得出定量的檢測結果。

內置的標準曲線是預先存儲在外部設備中的，它是一條信號光強弱與樣本中待測物質濃度的對應曲線（可以根據多次實驗總結擬合而成）。因此在測得光信號強度后即可對應得到濃度信息。

上述的應用逆向免疫層析反應的定量檢測方法中，樣本檢測的具體步驟包括：

①在試劑盒的其中一側的加樣孔中進行定量加樣，樣本在層析膜的毛細作用下層析移動至對照區域和檢測區域，并與對照區域和檢測區域內的物質發生反應；

②當外部設備檢測到待測樣本層析到指點位置，外部設備又在試劑盒的另一側的注液孔中先注入洗液，并在加樣孔上使用吸液泵進行抽吸，使洗液反向層析移動至加樣孔；

③然后在注液孔中加顯色液或發光液，同時吸液泵繼續工作，使顯色液或發光液和洗液進行同向層析，接著對照區域和檢測區域上發生顯色反應；

④最后外部設備對檢測區域和對照區域的光信號（包括顏色信號）進行自動識別，最終外部設備對信號的強弱以及內置的標準曲線進行比對分析后，得出定量的檢測結果，并將檢測結果顯示給使用者。

前述的應用逆向免疫層析反應的定量檢測方法中，所述檢測區域和對照區域為載有反應物（乳膠/磁珠/抗體）的點或線。

用于前述方法的試劑盒，其特點是：包括條形的層析膜，層析膜外包覆有盒體，盒體的中部設有檢測窗，檢測窗所在位置的層析膜上設有對照區域和檢測區域；所述檢測窗兩側的盒體上分別開設有用于添加樣本的加樣孔和用于添加洗液和顯色液或發光液的注液孔，注液孔還用于檢測樣本的層析位置；所述對照區域和檢測區域內分別載有與樣本反應的反應物。