[發明專利]抗CA50單克隆抗體產生的雜交瘤及化學發光免疫分析試劑盒的制備

無效

• 申請號: 201410035830.8
• 申請日: 2014-01-26
• 公開（公告）號: CN103777019A
• 公開（公告）日: 2014-05-07
• 發明（設計）人: 藍興國;李玉花;魏德強;李曉嶼;馮玥
• 申請（專利權）人: 東北林業大學;東北林業大學大慶生物技術研究院;李玉花
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577;G01N33/535;G01N21/76
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【技術領域】

本發明涉及CA50單克隆抗體產生的雜交瘤及檢測血清中CA50含量的試劑盒，可廣泛應用在醫學和及生物化學技術領域。?

【背景知識】

CA50是一種廣譜的腫瘤標志物，主要分布于糖脂及高分子蛋白中，不同腫瘤血清CA50陽性率不同。胰腺、肝臟、結腸、直腸等消化道惡性腫瘤患者中CA50陽性率較高。CA50在血清中的含量與腫瘤組織的大小、轉移與否及病情嚴重程度有直接的定量關系，是用于胰腺癌早期診斷的一個有效指標。CA50廣泛存在于上皮組織腫瘤中，CA50在血清中的含量與腫瘤組織的大小、轉移及病情的嚴重程度有著直接的定量關系，是胰腺癌早期診斷的一種有效手段。有研究表明，胰腺癌患者血清CA50的含量明顯高于正常組，而且其特異性較高。?

CA50與CA199同屬糖類蛋白抗原，與CA199有交叉免疫性，胰腺癌患者CA50檢出率約為50%。約10%的胰腺癌患者不產生CA199，僅產生CA50，CA50和CA199聯合檢測可修正部分CA199的假陰性結果。相關研究結果顯示，聯合檢測的敏感性和特異性均高于單一檢測。因此，CA50和CA199聯合檢測可提高胰腺癌的檢出率，有助于胰腺癌的早期診斷、療效觀察及復發預測。此外CA50和CA199與其他腫瘤標志物CEA及CA242的聯合檢測對胰腺癌診斷的特異性和敏感性高，具有較高臨床價值。?

【發明內容】

本發明的目的在于提供一種抗CA50單克隆抗體產生的雜交瘤以及建立一種簡單且具高靈敏度的檢測CA50的方法，并將該方法應用胰腺癌的早期篩查。以解決現有的單克隆抗體檢測CA50的靈敏度不夠或價格昂貴，不適合臨床大規模的應用的缺點。?

本發明的另一目的在于提供一種CA50化學發光免疫分析測定試劑盒以及該試劑盒的制備方法。利用該試劑盒分析檢測靈敏度高、特異性強。?

本發明獲得了能夠產生特異性識別CA50的單克隆抗體(mAb)的雜交瘤細胞株11-1與雜交瘤細胞株2-1，此2株細胞株分別在2014年1月19日保藏于中國典型培養物保藏中心（CCTCC），保藏地址是，中國.武漢.武漢大學，保藏編號為CCTCC?NO:C201417與CCTCC?NO:C201418。此外，經過鑒定，兩株單克隆抗體分別識別CA50的兩個不同表位，通過11-1與2-1的結合建立了雙抗體夾心酶聯免疫反應方法，其是一種高靈敏度及高通量的檢測系統。?

因此，本發明提供了下面所述的1至7的內容：?

1.抗CA50的雜交瘤細胞株，其保藏號分別為CCTCC?NO:C201417和CCTCC?NO:C201418。?

2.抗CA50的單克隆抗體，分別由保藏號為CCTCC?NO:C201417和CCTCC?NO:C201418的雜交瘤細胞系所分泌，所述單克隆抗體命名為11-1和2-1。?

3.如權利要求2所述的抗CA50單克隆抗體的應用，即利用所述的單克隆抗體的雙抗體夾心法ELISA檢測CA50，夾心法兩兩配對的抗體來源于保藏號為CCTCC?NO:C201417雜交瘤分泌的抗體11-1和保藏號為CCTCC?NO:C201418雜交瘤分泌的抗體2-1，其步驟包括：?

（1）以所述的兩兩配對的單克隆抗體11-1包被；?

（2）加入待測樣品孵育；?

（3）以所述的兩兩配對的HRP標記的另一株單克隆抗體2-1作為二抗，加入反應體系；?

（4）洗滌后加入酶反應底物，以450nm讀取OD值；?

（5）結果表明檢測的靈敏度很高。?

4.一種檢測血清中CA50含量的試劑盒，包括:包被有抗CA50單克隆抗體11-1的不透明聚苯乙烯板；CA50抗原系列標準品；酶標記的CA50單克隆抗體2-1；上述酶所作用的化學發光底物A液和B液以及洗滌液。?

5.如權利要求4所述的試劑盒，其特征在于：不透明聚苯乙烯板采用直接物理吸附法包被單克隆抗體11-1，包被液是碳酸鹽緩沖液；另一株CA50單克隆抗體2-1和辣根過氧化酶偶聯形成酶標記抗體，采用的是改良的過碘酸鈉法進行標記；CA50抗原系列標準品以小牛血清為基質，加入CA50抗原純品配置而成；發光底物A、B為HRP-Luminol發光體系。?