[發明專利]抗CA50單克隆抗體產生的雜交瘤及化學發光免疫分析試劑盒的制備

無效

• 申請號: 201410035830.8
• 申請日: 2014-01-26
• 公開（公告）號: CN103777019A
• 公開（公告）日: 2014-05-07
• 發明（設計）人: 藍興國;李玉花;魏德強;李曉嶼;馮玥
• 申請（專利權）人: 東北林業大學;東北林業大學大慶生物技術研究院;李玉花
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577;G01N33/535;G01N21/76
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.抗CA50的雜交瘤細胞株，其保藏號分別為CCTCC?NO：C201417和CCTCC?NO：C201418。?

2.抗CA50的單克隆抗體，分別由保藏號為CCTCC?NO:C201417和CCTCC?NO:C201418的雜交瘤細胞系所分泌，所述單克隆抗體命名為11-1和2-1。?

3.如權利要求2所述的抗CA50單克隆抗體的應用，即利用所述的單克隆抗體的雙抗體夾心法ELISA檢測CA50，夾心法兩兩配對的抗體來源于保藏號為CCTCC?NO:C201417雜交瘤分泌的抗體11-1和保藏號為CCTCC?NO:C201418雜交瘤分泌的抗體2-1，其步驟包括：?

（1）以所述的兩兩配對的單克隆抗體11-1包被；?

（2）加入待測樣品孵育；?

（3）以所述的兩兩配對的HRP標記的另一株單克隆抗體2-1作為二抗，加入反應體系；?

（4）洗滌后加入酶反應底物，以450nm讀取OD值；?

（5）結果表明檢測的靈敏度很高。?

4.一種檢測血清中CA50含量的試劑盒，包括:包被有抗CA50單克隆抗體11-1的不透明聚苯乙烯板；CA50抗原系列標準品；酶標記的CA50單克隆抗體2-1；上述酶所作用的化學發光底物A液和B液以及洗滌液。?

5.如權利要求4所述的試劑盒，其特征在于：不透明聚苯乙烯板采用直接物理吸附法包被單克隆抗體11-1，包被液是碳酸鹽緩沖液；另一株CA50單克隆抗體2-1和辣根過氧化酶偶聯形成酶標記抗體，采用的是改良的過碘酸鈉法進行標記；CA50抗原系列標準品以小牛血清為基質，加入CA50抗原純品配置而成；發光底物A、B為HRP-Luminol發光體系。?

6.如權利要求4所述的試劑盒，其特征在于：標記抗體所用的標記酶是辣根過氧化酶，用的是高碘酸鈉氧化法，所得酶標記抗體最佳的工作濃度是1：4000；包被有抗CA50抗體的不透明聚苯乙烯板采用的是直接物理吸附法包被；發光液A液用硼砂7.99g，硼酸3.46g，魯米諾0.28g，對碘苯酚0.07g，加工藝用水定容至700mL，避光保存；發光底物B液由下列成分組成：硼砂7.99g，硼酸3.46g，過氧化脲0.07g加工藝用水定容至700mL。?

7.如權利要求4-6所述試劑盒的制備方法，包括以下步驟:?

（1）標準品的配制和濃度的校正?

將CA50抗原純品，加入標準品稀釋液，配制一高濃度標準品濃液，采用逐低稀釋的方法稀釋到各濃度，配制成0、5、20、100、250、500U/mL的系列標準品，標準品用國家標準品校正。?

（2）包被?

采用0.2mol/L，pH值為9.5的0.2M碳酸鹽緩沖液與CA50單抗混合成抗體濃度是2μg/mL包被液，以100μL/孔包被在不透明的聚苯乙烯板上，4℃孵育過夜；?

（3）洗板?

用PBS-T洗液洗板孔2次；?

（4）封閉?

封閉液包含NaCl8.00g，KCl0.20g，Na₂HPO₄·12H₂O2.90g，KH₂PO₄0.20g，蔗糖20.00g，proclin3001.00mL，BSA20.00g，封閉液的PH值為7.3-7.5，150μL/孔封閉，濕盒放置孵育3h；?

（5）干燥?

去除封閉液，過夜干燥。?

（6）組裝為成品?

將聚苯乙烯板子放入鋁箔袋中并放入干燥劑，密封保存。?