[發(fā)明專利]一種基于膜過濾技術(shù)的埃博霉素B分離提取方法

有效

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• 申請日: 2014-01-23
• 公開（公告）號: CN103772407A
• 公開（公告）日: 2014-05-07
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 龔國利;趙婷峰
• 申請（專利權(quán)）人: 陜西科技大學
• 主分類號: C07D493/04
• 分類號: C07D493/04
• 代理公司: 西安通大專利代理有限責任公司 61200
• 代理人: 蔡和平

1.一種基于膜過濾技術(shù)的埃博霉素B分離提取方法，其特征在于，包括以下步驟：

（1）樹脂對發(fā)酵液進行吸附：將纖維堆囊菌在液體培養(yǎng)基中進行發(fā)酵，并向液體培養(yǎng)基中加入經(jīng)過處理的大孔樹脂，發(fā)酵120-150h后過濾得到吸附樹脂，然后用蒸餾水清洗除去吸附樹脂表面粘附的菌體；其中，大孔樹脂的加入量為液體培養(yǎng)基體積的2-5%；

（2）乙酸乙酯浸提：用乙酸乙酯浸提步驟（1）中經(jīng)過蒸餾水清洗的吸附樹脂，收集浸提液；

（3）用超濾膜過濾浸提液：將浸提液采用截留分子量為1000-5000的超濾膜過濾以去除大分子雜質(zhì)，得到粗提物；再將粗提物進行濃縮，得到濃縮液A；

（4）使用制備型HPLC檢測：將濃縮液A進行離心，收集上清液，再用HPLC檢測并合并埃博霉素B組分；

（5）結(jié)晶：將埃博霉素B組分進行真空濃縮，得到濃縮液B，將濃縮液B于-20～-10℃下進行低溫結(jié)晶，得到白色粉末狀結(jié)晶，即為埃博霉素B。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種基于膜過濾技術(shù)的埃博霉素B分離提取方法，其特征在于，所述步驟（1）中纖維堆囊菌菌株號為ATCC25532或ATCC25569。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種基于膜過濾技術(shù)的埃博霉素B分離提取方法，其特征在于，所述步驟（1）中大孔樹脂為XAD-16型大孔樹脂，并且采用如下方法進行處理：首先，用3～5倍大孔樹脂體積的甲醇浸泡大孔樹脂，搖床震蕩12h-16h后，除去甲醇，水洗至無甲醇味；再用甲醇浸泡12h-16h后，除去甲醇并水洗至無甲醇味。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種基于膜過濾技術(shù)的埃博霉素B分離提取方法，其特征在于，所述步驟（1）中液體培養(yǎng)基成分為土豆淀粉2.5～3.0g/L，蔗糖0.7～1.0g/L，葡萄糖0.2～0.5g/L，豆餅粉1.7～2.0g/L，MgSO₄·7H₂O2.3～2.5g/L，CaCl₂3.0～3.5g/L，EDTA-Fe³⁺2mL/L，微量元素0.5～1.0mL/L，pH值為7.2。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種基于膜過濾技術(shù)的埃博霉素B分離提取方法，其特征在于，所述步驟（2）中乙酸乙酯的用量為大孔樹脂體積的3～5倍，浸提的時間為24-48h。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種基于膜過濾技術(shù)的埃博霉素B分離提取方法，其特征在于，所述步驟（3）中超濾膜的材質(zhì)為聚砜、聚丙烯腈或聚酰胺。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種基于膜過濾技術(shù)的埃博霉素B分離提取方法，其特征在于，所述步驟（3）中超濾膜過濾的操作壓力為0.1-0.6MPa，溫度為0-40℃，控制流速為5-10mL/min。

8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種基于膜過濾技術(shù)的埃博霉素B分離提取方法，其特征在于，所述步驟（4）中HPLC檢測的參數(shù):分析柱為反相C18，規(guī)格為4.6mm×250mm，填料粒徑為5um；流動相:甲醇與水的體積比為65％:35％；流速:1mL/min；進樣體積:20uL；檢測波長:249nm；檢測時間:25min。

9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種基于膜過濾技術(shù)的埃博霉素B分離提取方法，其特征在于，所述步驟（4）中離心是在室溫下以8000-10000rpm的轉(zhuǎn)速離心10-15min。

10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種基于膜過濾技術(shù)的埃博霉素B分離提取方法，其特征在于，所述步驟（3）中濃縮和步驟（5）中濃縮的溫度均為40～45℃，真空度均為-0.085～-0.09MPa。