[發(fā)明專利]一種檢測(cè)人心臟微血管損傷標(biāo)志物miRNA21的引物及其應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201410027943.3
• 申請(qǐng)日: 2014-01-22
• 公開（公告）號(hào): CN103757118A
• 公開（公告）日: 2014-04-30
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 陳瑞珍;虞勇
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 復(fù)旦大學(xué)附屬中山醫(yī)院
• 主分類號(hào): C12Q1/68
• 分類號(hào): C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 上海卓陽知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 31262
• 代理人: 沈紅星

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及分子診斷技術(shù)領(lǐng)域，具體地說，是一種檢測(cè)人心臟微血管損傷標(biāo)志物miRNA21的引物及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

前期研究發(fā)現(xiàn)，柯薩奇B3病毒（CVB3）感染能損傷心臟微血管。以往對(duì)于心臟微血管的損傷缺乏靈敏、特異的診斷方法，傳統(tǒng)的病理學(xué)方法存在著操作復(fù)雜、有創(chuàng)性等缺點(diǎn)，病人難以接受，臨床上無法推廣應(yīng)用。因此，尋找一種高靈敏、特異性強(qiáng)、操作方便且病人能夠接受的檢測(cè)方法有著重要的臨床意義。

近年來的研究表明miRNA可能參與心血管系統(tǒng)的發(fā)育、分化和病理過程，其在心血管疾病中的調(diào)控作用日益受到重視。首先，miRNA的表達(dá)具有組織特異性，作為一類重要的調(diào)節(jié)因子，miRNA通過降解、翻譯抑制或激活目標(biāo)RNA調(diào)節(jié)其目標(biāo)基因的表達(dá)，而循環(huán)血中存在的特異性miRNA則有望作為心血管疾病的特異性標(biāo)志物。

中國(guó)期刊《中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十五次全國(guó)心血管病學(xué)大會(huì)論文匯編》，2013年刊出的論文《miRNA21通過靶基因PDCD4在柯薩奇B3病毒(CVB3)誘導(dǎo)的心臟微血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡中的作用和機(jī)制》，作者探討了miRNA21通過靶基因程序性死亡蛋白4(PDCD4)在柯薩奇B3病毒(CVB3)誘導(dǎo)的心臟微血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡中的作用和機(jī)制，通過在CVB3感染的CMECs模型上，采用miRNA芯片和qRT-PCR篩選并驗(yàn)證表達(dá)顯著差異的miRNA21，發(fā)現(xiàn)CMECs感染CVB3后miRNA21的表達(dá)上調(diào)了3.65倍，提示miRNA21可作為檢測(cè)CVB3誘導(dǎo)的心臟微血管損傷的標(biāo)志物，為病毒性心肌炎和擴(kuò)張性心肌病的臨床診斷、療效及預(yù)后判斷提供了新的指標(biāo)。但是目前關(guān)于可特異性檢測(cè)miRNA21且靈敏度高，檢測(cè)方法簡(jiǎn)單快捷，能充分滿足臨床需求的診斷試劑及方法還未見報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)中的不足，提供一種檢測(cè)人心臟微血管損傷標(biāo)志物miRNA21的引物。

本發(fā)明的再一的目的是，提供上述引物的用途。

本發(fā)明的另一的目的是，提供一種診斷人心臟微血管損傷的試劑盒。

本發(fā)明的第四個(gè)目的是，提供上述試劑盒的用途。

為實(shí)現(xiàn)上述第一個(gè)目的，本發(fā)明采取的技術(shù)方案是：

一種檢測(cè)人心臟微血管損傷標(biāo)志物miRNA21的引物，所述的引物的序列為：

引物I：5’GCGGTAGCTTATCAGACTG3’；

引物II：5’?CAGTGCGTGTCGTGGAGT3’

為實(shí)現(xiàn)上述第二個(gè)目的，本發(fā)明采取的技術(shù)方案是：

如上所述的引物在制備檢測(cè)或診斷人心臟微血管損傷藥物中的應(yīng)用。

其中，所述的人心臟微血管損傷可以是柯薩奇B3病毒感染所致的心臟微血管損傷，如病毒性心肌炎、擴(kuò)張性心肌病等。

為實(shí)現(xiàn)上述第三個(gè)目的，本發(fā)明采取的技術(shù)方案是：

一種診斷人心臟微血管損傷的試劑盒，所述的試劑盒包括如上所述的引物。

優(yōu)選地，所述的試劑盒還包括以下引物：

引物III：5’GCTTCGGCAGCACATATACTAAAAT3’；

引物IV：5’CGCTTCACGAATTTGCGTGTCAT3’。

優(yōu)選地，所述的試劑盒還包括dNTPs、Taq?DNA聚合酶和PCR反應(yīng)液。

為實(shí)現(xiàn)上述第四個(gè)目的，本發(fā)明采取的技術(shù)方案是：

如上任一所述的試劑盒在制備檢測(cè)或診斷人心臟微血管損傷藥物中的應(yīng)用。

其中，所述的人心臟微血管損傷可以是柯薩奇B3病毒感染所致的人心臟微血管損傷。

本發(fā)明優(yōu)點(diǎn)在于：本發(fā)明的引物能用于檢測(cè)或診斷人心臟微血管損傷，尤其是柯薩奇B3病毒感染所致的人心臟微血管損傷，相比于其它引物特異性、靈敏度都顯著較高，從而為該疾病的臨床診斷提供了一種特異性強(qiáng)、靈敏度高、快捷的檢測(cè)方法，且易于被患者接受，適于制備成試劑盒在臨床上普遍推廣。

附圖說明

附圖1是病毒性心肌炎組與對(duì)照組外周血中miRNA21表達(dá)差異比較。

附圖2是miRNA21擴(kuò)增曲線。

附圖3是內(nèi)參U6擴(kuò)增曲線。

附圖4是miRNA21溶解曲線。

附圖5是內(nèi)參U6溶解曲線。

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合附圖對(duì)本發(fā)明提供的具體實(shí)施方式作詳細(xì)說明。

實(shí)施例1??qRT-PCR檢測(cè)人外周血中miRNA21表達(dá)

一、標(biāo)本采集