[發明專利]一種耐高溫酸性β-甘露聚糖酶Man-L30及其基因和應用有效

申請號：	201410023196.6	申請日：	2014-01-17
公開（公告）號：	CN103740682A	公開（公告）日：	2014-04-23
發明（設計）人：	吳培均;李富偉;羅建杰;李兆勇	申請（專利權）人：	北京科為博生物科技有限公司
主分類號：	C12N9/42	分類號：	C12N9/42;C12N15/56;C12N15/81;C12N1/19;C12R1/10;C12R1/84;C12R1/865;C12R1/78
代理公司：	北京法思騰知識產權代理有限公司 11318	代理人：	楊小蓉
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摘要：
搜索關鍵詞：	一種耐高溫酸性甘露聚糖 man l30 及其基因應用
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【說明書】：

技術領域

本發明涉及基因工程領域，具體地，本發明涉及一種耐高溫酸性β-甘露聚糖酶Man-L30及其基因和應用。

背景技術

β-甘露聚糖酶（β-mannanase?EC3.2.1.78）是一種半纖維素水解酶，以內切方式降解β-1,4糖苷鍵，降解產物的非還原末端為甘露糖，其作用底物包括葡萄甘露聚糖、半乳甘露聚糖及β-甘露聚糖等。β-甘露聚糖酶的來源非常廣泛，包括植物、細菌、真菌、放線菌甚至軟體動物。甘露聚糖是植物性飼料原料中除纖維素、木聚糖之外，分布最廣泛、含量最高的一類半纖維素，而且在許多植物中有淀粉樣的大量積累。畜禽和魚類的消化酶系不含甘露聚糖酶，對這類物質的轉化需要添加外源酶。飼料中添加甘露聚糖酶可消除和降解飼料原料中的抗營養因子，促進畜禽生長，減少養殖污染。甘露聚糖類物質作為半纖維素的第二大組分，廣泛分布于自然界中。它是所有豆科植物細胞壁的主要組成成分，在其他植物性飼料原料中含量也很高，如豆粕、小麥、菜籽粕、麩皮中半乳甘露聚糖占非淀粉多糖的含量分別為22.7%、11.9%、19.6%和33.7%，在一些植物膠、椰子、萵苣、合歡、魔芋以及針葉樹中也都含有豐富的甘露聚糖和異甘露聚糖。這使得β-甘露聚糖酶的開發和利用具有重要的意義。

β-甘露聚糖酶和甘露寡糖的推廣應用，符合生態養殖業的需要。它們還可廣泛應用于食品、紡織、石油等工業領域，如甘露寡糖是最有效的雙岐因子之一，可以口服，國內外已經廣泛地用于保健食品中。β-甘露聚糖酶還可用于從豆類植物中提煉植物油，降低咖啡、巧克力、可可液的粘性。β-甘露聚糖酶和木聚糖酶協同作用可用于造紙工業。β-甘露聚糖酶還可作為石油壓裂液的破膠劑具有效力高、成本低、對地層傷害小等優點。特別是利用該酶來水解魔芋以制備高純度的甘露寡糖，其市場前景十分廣闊。作為生產原料的魔芋廣泛的分布于四川、云南、貴州、湖北西部等欠發達的山區，該酶的大規模生產對于科技扶貧也有著重要的推動作用。因而，近年來β-甘露聚糖酶的研究逐漸成為了國內外的研究熱點。但是國內各有關科研單位的研究大多限于實驗室階段，所報道的發酵酶活性低，酶解產物組成不穩定，生產成本較高，難以取得競爭優勢。篩選高比活酶基因，應用基因工程技術構建高效產酶的微生物，進行分子育種改良酶的性質，優化寡糖的酶解制備工藝，是國際上的研究熱點和方向，也具有很好的科學意義和應用前景。

本發明從Bacillus?licheniformis?CRVAB001菌株中得到了一個新的β-甘露聚糖酶基因，其編碼的甘露聚糖酶具有以下幾個優點：耐高溫、酸性、良好的pH穩定性和蛋白酶抗性。作為一種新的β-甘露聚糖酶，在飼料、食品、醫藥等行業中將會具有重要的應用價值。

發明內容

本發明的目的是提供一種耐高溫酸性β-甘露聚糖酶。

本發明的另一目的是提供上述β-甘露聚糖酶的基因。

本發明的另一目的是提供包含上述β-甘露聚糖酶的重組載體。

本發明的另一目的是提供包含上述β-甘露聚糖酶基因的重組菌株。

本發明的另一目的是提供一種制備上述β-甘露聚糖酶的方法。

本發明的另一目的是提供上述β-甘露聚糖酶的應用。

本發明首先所要解決的技術問題是克服現有技術的不足，提供一種性質優良的、適合于在飼料、食品、醫藥等行業中應用的新的耐高溫酸性β-甘露聚糖酶。本發明的耐高溫酸性β-甘露聚糖酶Man-L30，其氨基酸序列如SEQ?ID?NO.1所示：

MKKNIVCSIF?ALLLAFAVSQ?PSYAHTVSPV?NPNAQPTTKA?VMNWLAHLPN

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