[發(fā)明專利]一種在基因修飾的煙草花葉病毒殼蛋白模板上進(jìn)行納米金生長的方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410018780.2
• 申請日: 2014-01-16
• 公開（公告）號: CN103706800A
• 公開（公告）日: 2014-04-09
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 劉楠;張威;羅安娜;王英元;馮曉民;何聲寶;閆新甫
• 申請（專利權(quán)）人: 國家煙草質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)中心
• 主分類號: B22F9/00
• 分類號: B22F9/00;C12N15/34;C12N15/70;C07K14/01;B82Y30/00;B82Y40/00
• 代理公司: 鄭州中民專利代理有限公司 41110
• 代理人: 姜振東

1.一種在基因修飾的煙草花葉病毒殼蛋白模板上進(jìn)行納米金生長的方法，也即基于基因修飾的TMVCP模板的一維金納米復(fù)合材料的制備方法，其特征在于：是以基因修飾的TMVCP為模板，通過其與含金元素基團(tuán)的靜電作用，在其表面吸附含金元素基團(tuán)，最后加入還原劑，從而實(shí)現(xiàn)了納米金在基因修飾的TMVCP模板表面的生長，得到了新型的TMVCP-納米金一維復(fù)合材料。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的在基因修飾的煙草花葉病毒殼蛋白模板上進(jìn)行納米金生長的方法，其特征在于：包括以下具體步驟：

（1）以六聚組氨酸（His-tag）對煙草花葉病毒殼蛋白TMVCP進(jìn)行基因修飾，得到基因修飾的煙草花葉病毒殼蛋白模板His-TMVCP，將His-TMVCP分散于去離子水中，得到濃度約為0.3~0.5?mg/mL的懸浮液；

（2）將10~15?mL此懸浮液、5~7?mL乙酸溶液、0.3~0.5?mL氯金酸溶液一同置于反應(yīng)容器中，在避光條件下攪拌2~3?h；

（3）將1~1.5?mL的水合肼溶液加入反應(yīng)物中，室溫下將反應(yīng)物靜置2~3?h；

（4）用去離子水、以離心的方法對產(chǎn)物進(jìn)行多次洗滌、提純，得到深棕色絮狀產(chǎn)物即本發(fā)明的的目標(biāo)產(chǎn)物，將該產(chǎn)物再次分散于去離子水中，得到含有目標(biāo)產(chǎn)物的懸浮液，該目標(biāo)產(chǎn)物即為基于基因修飾的TMVCP模板的一維金納米復(fù)合材料。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的在基因修飾的煙草花葉病毒殼蛋白模板上進(jìn)行納米金生長的方法，其特征在于：步驟（2）中的乙酸溶液的質(zhì)量濃度為5%，氯金酸溶液濃度為0.01?M。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的在基因修飾的煙草花葉病毒殼蛋白模板上進(jìn)行納米金生長的方法，其特征在于：步驟（2）中的水合肼溶液濃度為10^-3?M。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的在基因修飾的煙草花葉病毒殼蛋白模板上進(jìn)行納米金生長的方法，其特征在于：步驟（1）中所述的基因修飾的煙草花葉病毒殼蛋白模板His-TMVCP是通過以下方法制備的：①兩條引物被用來擴(kuò)增TMV外殼蛋白（WT-TMV-CP），上游引物TMVCP?F1，GATTCGTTTTACATATGTCTTACAGTATVACTAC，和下游引物His-TMV-CP?R1，TAGTACCATGGTCATTAGTGATGGTGATGGTGATGAGTTTGCAGGACCAGAGGTC；②PCR產(chǎn)物使用T4DNA連接酶連接進(jìn)入pET28a載體；③?在羧基端含有6*His?標(biāo)簽的含有確定DNA序列的His-TMV-CP質(zhì)粒被亞克隆進(jìn)原核表達(dá)菌株Rosetta中進(jìn)行蛋白表達(dá)；④上柱純化蛋白時(shí)，首先以50?mL預(yù)冷緩沖液沖洗柱子,隨后，再以沖洗緩沖液-40沖洗柱子，最后，使用洗脫緩沖液來洗脫目標(biāo)蛋白。