[發(fā)明專利]免疫增強(qiáng)的人乳頭瘤病毒感染及相關(guān)疾病的治療性疫苗

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410017909.8
• 申請日: 2014-01-15
• 公開（公告）號: CN103772508B
• 公開（公告）日: 2017-05-10
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 邊濤;李娟;肖嘯
• 申請（專利權(quán)）人: 深圳泰來生物醫(yī)藥有限公司
• 主分類號: C07K19/00
• 分類號: C07K19/00;C12N15/861;C12N7/01;A61K39/12;A61K48/00;A61P31/20;A61P35/00;A61P15/00
• 代理公司: 北京紀(jì)凱知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司11245
• 代理人: 趙蓉民,王永偉

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于疫苗領(lǐng)域，具體涉及一種人乳頭瘤病毒持續(xù)性感染及其所誘發(fā)的宮頸癌及其它病變的治療性疫苗，更具體的，涉及含有免疫增強(qiáng)劑的人乳頭瘤病毒治療性疫苗。

背景技術(shù)

世界范圍內(nèi)，宮頸癌是女性第二大高發(fā)癌癥，每年約274,000患者死于該病。所有的宮頸癌均可檢出HPV感染。此外，肛門、陰道、陰莖癌及某些口腔癌及喉癌也與HPV感染有關(guān)。雖然目前已經(jīng)有兩種預(yù)防性疫苗投放市場，但其對已存在的HPV感染并無任何治療效果，更無法阻斷病變惡性化進(jìn)程。并且，據(jù)估算現(xiàn)已被HPV感染的病人基數(shù)很大，所以通過大規(guī)模接種預(yù)防性疫苗達(dá)到減少宮頸癌發(fā)病率，至少需要20年后才能明顯見效。由于已有大量人群感染病毒甚至已發(fā)生宮頸癌或癌前病變，因此以清除已被感染的細(xì)胞和癌細(xì)胞為目的的治療性疫苗的研發(fā)非常迫切。人乳頭瘤病毒E6和E7蛋白是HPV病毒攜帶的二個(gè)致癌基因所編碼的癌蛋白，屬非自體的外源蛋白抗原，從癌前病變到宮頸癌發(fā)生它們都持續(xù)穩(wěn)定表達(dá)，因此是非常理想的免疫治療靶點(diǎn)。大量臨床研究都試圖以這兩種癌蛋白為靶點(diǎn)，包括重組病毒、多肽、蛋白和DNA疫苗。這些治療性疫苗都顯示了很好的安全性，在某些病人身上也出現(xiàn)了病灶的消退和生存期延長。此外，研究表明疫苗免疫所誘發(fā)的T細(xì)胞免疫強(qiáng)度與治療治療效果有關(guān)。盡管某些臨床研究已經(jīng)出現(xiàn)希望，但如果想徹底治愈持續(xù)感染和清除癌癥，還需要新的策略來誘導(dǎo)足以強(qiáng)大的抗腫瘤特異性抗原的T細(xì)胞免疫反應(yīng)。

熱休克蛋白（HSP）可以有效地調(diào)節(jié)細(xì)胞功能，增強(qiáng)免疫反應(yīng)。首先，它可以作為“分子伴侶”起作用，幫助蛋白運(yùn)輸定位和輔助蛋白折疊。其次，它可以活化專職抗原遞呈細(xì)胞（APC），而HSP70可以與巨噬細(xì)胞上的受體結(jié)合，從而有效激活其免疫反應(yīng)。SGN-00101是一種融合有HPV16型E7蛋白和結(jié)核桿菌的HSP65的融合蛋白，其已經(jīng)表現(xiàn)出了良好的安全性，并且對抑制宮頸上皮細(xì)胞的高度不典型增生有一定效果。

粒-單核細(xì)胞集落刺激因子（GM-CSF）是已被廣泛研究并被認(rèn)為是最有效的免疫治療因子之一。它可以介導(dǎo)自然殺傷細(xì)胞和通過抗原提呈細(xì)胞來活化腫瘤特異的CD8⁺殺傷性T淋巴細(xì)胞，從而起到抗腫瘤作用。諸多動(dòng)物和臨床試驗(yàn)已經(jīng)證實(shí)其可以長期有效激發(fā)腫瘤抑制免疫反應(yīng)。例如，Sipuleucel-T作為一種免疫治療藥物，就是利用了GM-CSF活化抗原遞呈細(xì)胞的特點(diǎn)，現(xiàn)在已經(jīng)被美國食品藥品安全管理局批準(zhǔn)上市。Jennerex等人的最新臨床研究也表明表達(dá)有GM-CSF的融癌痘苗病毒可以減小多種癌癥病灶。但這些增強(qiáng)免疫的方法其療效都不理想，要么缺乏腫瘤抗原特異性，要么免疫刺激強(qiáng)度欠佳。

發(fā)明內(nèi)容

為了解決上述問題，本發(fā)明提供了一種免疫增強(qiáng)的人乳頭瘤病毒感染及相關(guān)疾病的治療性疫苗。

首先，本發(fā)明提供一種人乳頭瘤病毒及免疫增強(qiáng)分子五基因型融合抗原，其含有人乳頭瘤病毒16型的E6、E7蛋白和人乳頭瘤病毒18型的E6、E7蛋白及免疫增強(qiáng)分子佐劑蛋白。

本發(fā)明采用多價(jià)抗原線性排列的方式，對融合蛋白的T細(xì)胞表位未有影響。在治療疫苗中起中心作用的是T細(xì)胞免疫反應(yīng)，而T細(xì)胞抗原決定簇在遞呈過程中被降解成線性短肽，而識(shí)別位點(diǎn)一般僅有大約8個(gè)氨基酸，所以各種抗原排列順序也對免疫激發(fā)沒有實(shí)質(zhì)影響。本發(fā)明我們?nèi)诤狭薍PV16及18型的4抗原蛋白與熱休克蛋白分子，融合更多HPV抗原有更大的優(yōu)勢：可以提供更多的潛在抗原決定簇，增強(qiáng)抗原的遞呈及增加免疫反應(yīng)，對更多不同基因型的HPV感染起作用。從而有效的提高潛在的疫苗免疫的受益人群；并且更大的蛋白更容易被降解提成，從而激發(fā)更強(qiáng)的免疫反應(yīng)。

在本發(fā)明一個(gè)實(shí)施方案中，所述的融合抗原具有下述一或多個(gè)突變位點(diǎn)，其中，所述的人乳頭瘤病毒16型E6蛋白的突變位點(diǎn)為：121位的谷氨酸突變?yōu)楦拾彼幔?22位的賴氨酸突變?yōu)楦拾彼幔凰龅娜巳轭^瘤病毒16型E7蛋白的突變位點(diǎn)為：24位的半胱氨酸突變?yōu)楦拾彼幔?6位的谷氨酸突變?yōu)楦拾彼幔凰龅娜巳轭^瘤病毒18型E6蛋白的突變位點(diǎn)為：116位的谷氨酸突變?yōu)楦拾彼幔?17位的賴氨酸突變?yōu)楦拾彼幔凰龅娜巳轭^瘤病毒18型E7蛋白的突變位點(diǎn)為：27位的半胱氨酸突變?yōu)楦拾彼幔?9位的谷氨酸突變?yōu)楦拾彼帷?/p>