[發明專利]超螺旋DNA含量的測定方法

無效

• 申請號: 201410015213.1
• 申請日: 2014-01-14
• 公開（公告）號: CN103852530A
• 公開（公告）日: 2014-06-11
• 發明（設計）人: 王學海;李杰;李莉娥;許勇;何昆;陳愛芳;呂興凱;田呂明;馬梵辛;楊仲文;涂榮華;肖強;張緒文;馬錚;裴達;黃韞韜
• 申請（專利權）人: 人福醫藥集團股份公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02
• 代理公司: 北京清亦華知識產權代理事務所(普通合伙) 11201
• 代理人: 李志東

1.一種超螺旋DNA含量的測定方法，其特征在于，包括：

采用AKTAexplorer^TM10檢測儀器并利用分子篩色譜柱對待測樣品進行第一檢測分離處理，以便獲得總DNA樣品，計算總DNA樣品的質量含量；以及

采用嗜硫芳香色譜柱對所述總DNA樣品進行第二檢測分離處理，并計算得到超螺旋DNA在所述待測樣品中的質量含量。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述第一檢測分離處理和所述第二檢測分離處理采用的紫外檢測波長分別為OD₂₆₀。

3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述分子篩色譜柱為5ml-HiTrap?Sepharose?HP色譜柱。

4.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述的嗜硫芳香色譜柱為1ml-HiTrap?PlasmidSelect?Xtra色譜柱。

5.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述第一檢測分離處理是采用流動相A進行第一洗脫完成的，所述流動相A包含2.1M(NH₄)₂SO₄、10mM?EDTA以及100mM?Tris-Hcl，pH7.5。

6.根據權利要求4所述的方法，其特征在于，所述第一洗脫的線性流速為60cm/h。

7.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述第二檢測分離處理是采用流動相B和流動相C進行第二洗脫完成的，所述流動相B包含2.25M(NH₄)₂SO₄、10mM?EDTA以及100mM?Tris-Hcl，pH7.5，所述流動相C包含2.0M?NaCl、10mM?EDTA以及100mM?Tris-Hcl，pH7.5。

8.根據權利要求6所述的方法，其特征在于，所述第二洗脫是以（100%流動相B、0%流動相C）～（45%流動相B、55%流動相C）的梯度洗脫方式進行的。

9.根據權利要求8所述的方法，其特征在于，所述第二洗脫的線性流速為60cm/h，所述第二洗脫的洗脫體積為11個柱體積。