[發明專利]從地榆中分離三種鞣質單體組分的方法

有效

• 申請號: 201410003957.1
• 申請日: 2014-01-06
• 公開（公告）號: CN103913522A
• 公開（公告）日: 2014-07-09
• 發明（設計）人: 鄒文俊;高小平;吳建明;李小芳;代燕平
• 申請（專利權）人: 成都中醫藥大學
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06
• 代理公司: 成都高遠知識產權代理事務所(普通合伙) 51222
• 代理人: 李高峽;杜朗宇

技術領域

本發明涉及從地榆中分離三種鞣質單體組分的方法，主要涉及沒食子酸、3,3′,4′-O-三甲基逆沒食子酸-4-O-β-D-木糖苷和3,3’,4’-O-三甲基逆沒食子酸的高效液相色譜分離方法。

背景技術

鞣質又稱單寧，是存在于植物體內的一類結構比較復雜的多元酚類化合物。它的藥理活性除常見的收斂、抗菌消炎、止血、驅蟲、止瀉、抗多種病原蟲感染性疾病外，還表現在人們非常關注的抗腫瘤、抗人類免疫缺陷病毒（HIV）、抗突變、抗脂質過氧化，抗衰老、心血管病、改善肝腎功能、預防應激性胃腸損傷、抗白內障、對重金屬鹽和生物堿中毒有解毒作用等方面有獨到功效。

根據鞣質的化學結構可分為可水解鞣質、縮合鞣質和復合鞣質三大類。其中可水解鞣質是一類由酚酸及其衍生物與葡萄糖或多元醇通過甙鍵或酯鍵而形成的化合物。依水解后所得酚酸類的不同，又可分為沒食子酸鞣質和逆沒食子酸鞣質兩類，其中沒食子酸與3,3’,4’-O-三甲基逆沒食子酸分別為沒食子酸鞣質和逆沒食子酸鞣質水解產生的兩類酚酸及其衍生物，3,3′,4′-O-三甲基逆沒食子酸-4-O-β-D-木糖苷為逆沒食子酸鞣質，這三種單體組分的結構式分別為：

沒食子酸

3,3′,4′-O-三甲基逆沒食子酸-4-O-β-D-木糖苷

3,3’,4’-O-三甲基逆沒食子酸

見載于文獻的分離地榆鞣質類物質的分離方法主要為柱層析技術（王滿力，陳桐.柱色譜法分離地榆中的鞣質和皂苷，色譜，1994,12（4）），但該方法產率低、耗時、耗力，且只能將總鞣質和總皂苷分離，而無法獲得鞣質單體組分。目前為止尚未公開有高效液相色譜法分離地榆粗提物中三種單體組分的方法，它是一種能夠快速、高效分離地榆粗提物中鞣質類組分的分離方法，但應對流動相的條件等進行嚴格限制，因為鞣質類組分多具有酚羥基結構，容易發生離子化同時洗脫液在濃縮過程中目標化合物易破壞及流動相易殘留，所以應對流動相的選擇及其條件進行嚴格限制。

發明內容

本發明提供了從地榆中分離沒食子酸、3,3′,4′-O-三甲基逆沒食子酸-4-O-β-D-木糖苷、3,3’,4’-O-三甲基逆沒食子酸的方法。

本發明提供了從地榆中分離三種鞣質單體組分的方法，所述的三種單體組分分別是沒食子酸、3,3′,4′-O-三甲基逆沒食子酸-4-O-β-D-木糖苷、3,3’,4’-O-三甲基逆沒食子酸，它包括如下操作步驟：

（1）取地榆提取物，制備供試品溶液，所述地榆提取物為地榆總鞣質或地榆的70～95%v/v甲醇提取物；

（2）將供試品溶液注入制備型高效液相色譜儀中，以甲醇-酸水溶液為流動相進行梯度洗脫，在線監測，分別收集所述三種組分的洗脫液，將各洗脫液減壓濃縮、干燥后，得3,3′,4′-O-三甲基逆沒食子酸-4-O-β-D-木糖苷、3,3’,4’-O-三甲基逆沒食子酸兩個純化樣品以及沒食子酸粗制品；

（3）取步驟（2）制備的沒食子酸粗制品，注入制備型高效液相色譜儀中，以甲醇-酸水溶液為流動相進行洗脫，在線監測，收集沒食子酸組分的洗脫液，減壓濃縮、干燥，即得沒食子酸純化樣品；

其中，步驟（2）采用的色譜條件如下：制備型色譜柱固定相為十八烷基鍵合硅膠；流動相為甲醇-酸水溶液系統，所述甲醇-酸水溶液系統為：以體積百分比計，甲醇體積濃度為20%～100%的甲醇-酸水溶液的梯度洗脫液；

步驟（3）采用的色譜條件如下：制備型色譜柱固定相為十八烷基鍵合硅膠；流動相為甲醇-酸水溶液系統，所述甲醇-酸水溶液系統為：以體積百分比計，甲醇體積濃度為5%～100%的甲醇-酸水溶液的梯度洗脫液；

步驟（2）、（3）中，檢測波長為210nm、254nm或/和280nm。

進一步地，步驟（1）中所述地榆提取物為地榆的80%v/v甲醇提取物。

進一步地，步驟（2）中，所述甲醇-酸水溶液系統的梯度洗脫條件如下：