[發(fā)明專利]用于生物分子檢測的催化性核酸和金納米粒子無效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201380078689.3 | 申請日： | 2013-06-12 |
| 公開（公告）號： | CN105431547A | 公開（公告）日： | 2016-03-23 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 沃倫·切·沃·陳;基里洛·扎戈洛夫斯基 | 申請（專利權(quán)）人： | 多倫多大學(xué)理事會 |
| 主分類號： | C12Q1/68 | 分類號： | C12Q1/68;C07H21/00;C40B30/04 |
| 代理公司： | 廣州粵高專利商標代理有限公司 44102 | 代理人： | 陳衛(wèi);鄭永泉 |
| 地址： | 加拿大*** | 國省代碼： | 加拿大;CA |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 用于 生物 分子 檢測 催化 核酸 納米 粒子 | ||
1.一種檢測樣品中生物靶標的存在的方法，其特征在于，所述方法包括：
(a)將所述樣品與下列項接觸：
(i)未催化的核酸底物，
(ii)催化性核酸，所述催化性核酸經(jīng)配置以在所述靶標的存在下單獨地催化所述底物，及
(iii)金納米粒子（GNP），GNP用連接部分官能化，以與所述未催化的核酸底物組裝；以及
(b)分析所述樣品以確定所述GNP是處于實質(zhì)上分散的形式還是處于與所述未催化的核酸底物組裝的形式，其中所述GNP處于實質(zhì)上分散的形式表明所述靶標存在于所述樣品中。
2.權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，在合適的溫度下在足量時間內(nèi)首先將(i)和(ii)添加到所述樣品中，然后將(iii)添加到所述樣品中。
3.權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述催化性核酸以預(yù)催化性核酸亞單位形式提供，每個預(yù)催化性核酸亞單位包括經(jīng)配置以結(jié)合到所述靶標的至少部分上的傳感器域，及當所述靶標結(jié)合到所述傳感器域上時單獨地催化所述未催化的核酸底物的催化域。
4.權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述連接部分包括核酸鏈，該核酸鏈與用于組裝的所述未催化的核酸底物的3'末端和5'末端雜交。
5.權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，在所述組裝的形式下，所述GNP將所述樣品變成第一顏色，且在所述實質(zhì)上分散的形式下，所述GNP將樣品變成第二顏色，并且其中步驟(b)包括確定所述樣品的顏色，其中所述第二顏色表明所述樣品中靶標的存在。
6.權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述未催化的核酸底物、所述催化性核酸和所述GNP經(jīng)官能化而成為靶特異性的。
7.一種同時檢測樣品中關(guān)注的多種不同生物靶標的存在的方法，其特征在于，所述方法包括：
(a)將懷疑具有所述多種不同生物靶標的所述樣品與(i)靶特異性的未催化的核酸底物和(ii)靶特異性的催化性核酸的靶特異性的組混合，在每個靶特異性的組中的所述催化性核酸經(jīng)配置以在其靶標的存在下單獨地催化所述未催化的底物；
(b)將步驟(a)的混合物與單獨的靶特異性的GNP群接觸，在每個靶特異性的群中的所述GNP用連接部分官能化，以與其相應(yīng)的靶特異性的未催化的核酸底物組裝；及
(c)對于每個單獨的靶特異性的GNP群，確定所述靶特異性的GNP是處于與所述相應(yīng)的靶特異性的未催化的底物組裝的形式還是處于實質(zhì)上分散的形式，其中在一個群中所述靶特異性的GNP處于實質(zhì)上分散的形式表明相應(yīng)于該靶特異性的GNP群的所述靶標存在于所述樣品中。
8.權(quán)利要求7所述的方法，其特征在于，所述催化性核酸以預(yù)催化性核酸亞單位形式提供，每個預(yù)催化性核酸亞單位包括用于特異性結(jié)合到所述多種不同靶標中的一種上的傳感器域，及經(jīng)配置以當相應(yīng)的靶標結(jié)合到所述傳感器臂上時單獨地催化其相應(yīng)的靶特異性的未催化的核酸底物的催化域。
9.權(quán)利要求7所述的方法，其特征在于，在組裝的形式下，所述GNP將所述樣品變成第一顏色，且在實質(zhì)上分散的形式下，所述GNP將所述樣品變成第二顏色，并且其中所述方法的步驟(c)包括對于每個GNP群，確定所述樣品的顏色。在一個GNP群中檢測到所述第二顏色表明所述樣品中該GNP群的靶標的存在。
10.權(quán)利要求1至9中任一項所述的方法，其特征在于，所述方法進一步包括將所述樣品滴到薄層色譜（TLC）板上，用于視覺檢測。
11.權(quán)利要求10所述的方法，其特征在于，所述方法進一步包括儲存所述TLC，用于以后查看。
12.權(quán)利要求1至9中任一項所述的方法，其特征在于，所述方法進一步包括峰值吸光度的紫外-可見光譜位移的光譜測量。
13.權(quán)利要求1至9中任一項所述的方法，其特征在于，所述催化性核酸和所述未催化的核酸底物以凍干的混合物形式提供。
14.權(quán)利要求1至9中任一項所述的方法，其特征在于，所述催化性核酸、所述未催化的核酸底物和所述GNP以凍干的形式提供。
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