[發明專利]用于高效率且高通量產生轉基因事件的改進的分割種子大豆轉化

在審

• 申請號: 201380073296.3
• 申請日: 2013-12-19
• 公開（公告）號: CN105264077A
• 公開（公告）日: 2016-01-20
• 發明（設計）人: D·帕雷迪;S·R·切納雷迪;T·明尼克斯;O·卡爾波娃;D·格里芬;P·S·賈亞庫馬爾;K·史密斯;R·薩里亞-米蘭
• 申請（專利權）人: 美國陶氏益農公司
• 主分類號: C12N15/82
• 分類號: C12N15/82
• 代理公司: 北京坤瑞律師事務所 11494
• 代理人: 羅天樂

1.一種產生轉基因事件的方法，該方法包括：

將切割工具插入大豆種子的種皮以形成第一子葉節段和第二子葉節段，其中所述種子包含胚軸；

用土壤桿菌接種包含部分所述胚軸的第一子葉節段，所述土壤桿菌包含至少一個轉基因；并

培養經接種的子葉節段以在經轉化的植物細胞中產生轉基因事件。

2.權利要求1的方法，其中該方法還包括在接種所述第一子葉節段之前從所述第一子葉節段和第二子葉節段除去種皮。

3.權利要求1的方法，其中插入切割工具包括縱向切割胚軸以保留部分胚軸與每個子葉節段在一起。

4.權利要求3的方法，其中在插入切割工具之前大豆種子工具的胚軸有一未切割長度，且所述第一子葉節段的部分胚軸的長度是該大豆種子的胚軸的未切割長度的大約1/3至1/2。

5.權利要求4的方法，還包括切割所述第一子葉節段的部分胚軸至該大豆種子的胚軸的未切割長度的約1/3至1/2的長度。

6.權利要求3的方法，其中在插入切割工具之前該大豆種子的胚軸有一未切割長度，且所述第一子葉節段的部分胚軸的長度與該未切割長度相等。

7.權利要求1的方法，其中插入切割工具包括沿著該大豆種子的種臍縱向切割該大豆種子。

8.權利要求7的方法，還包括定位該大豆種子的外表面上的種臍，并在插入切割工具之前將切割工具相對于該大豆種子定向，使得切割工具與該種臍對齊。

9.權利要求8的方法，其中每個子葉節段包含部分種臍。

10.權利要求7的方法，其中該大豆種子具有延伸穿過所述種臍的縱軸，該縱軸將該大豆種子分為第一側和第二側，該方法還包括在插入切割工具之前握住該大豆種子的第一側。

11.權利要求1的方法，其中插入切割工具包括在形成所述第一和第二子葉節段之前將切割工具推進到該大豆種子的胚軸內。

12.權利要求1的方法，其中該方法還包括從經培養的經接種的子葉節段產生完整、能育的大豆植物，其中該完整、能育的大豆植物包含所述轉基因事件。

13.通過權利要求12的方法產生的完整、能育的大豆植物，其中該完整、能育的大豆植物的轉基因事件包括所述轉基因事件。

14.權利要求12的方法，其中該方法還包括產生所述完整、能育的大豆植物的后代，其中該后代植物包含所述轉基因事件，并且該方法任選地包括從該后代植物產生大豆種子。

15.通過權利要求14的方法產生的后代植物，其中該后代植物包含所述轉基因事件。

16.通過權利要求14的方法產生的大豆種子，其中該大豆種子從所述后代植物產生，且該大豆種子包含所述轉基因事件。

17.權利要求14的方法，還包括產生后代植物，該方法還包括下述步驟：

(a)使所述完整能育的大豆植物與另一大豆植物雜交，

(b)從步驟(a)的雜交收獲后代種子，其中該后代種子包含所述轉基因事件，

(c)播種該后代種子，

(d)從該后代種子種植后代植物，該后代植物包含所述轉基因事件，和

(e)從步驟(d)中種植的后代植物產生后續的后代植物，該后續的后代植物包含所述轉基因事件。

18.權利要求1的方法，其中所述轉基因選自下組：殺蟲劑抗性基因、除草劑耐受性基因、氮利用效率基因、水利用效率基因、營養品質基因、DNA結合基因、以及可選擇標志物基因。

19.一種產生轉基因事件的方法，該方法包括：

將切割工具插入種子的種皮以產生包含部分胚軸的子葉節段，

用土壤桿菌接種該包含部分胚軸的子葉節段，所述土壤桿菌包含至少一個轉基因，

培養該經接種的子葉節段而在經轉化的植物細胞中產生轉基因事件，以及

從該經培養的經接種的子葉節段產生完整、能育的植物，所述完整、能育的植物包含所述轉基因事件。

20.權利要求19的方法，其中所述種子是雙子葉植物種子。

21.權利要求19的完整、能育植物的后代植物，該后代植物包含所述轉基因事件。