[發明專利]纖維二糖水解酶的變體

在審

• 申請號: 201380064212.X
• 申請日: 2013-12-10
• 公開（公告）號: CN104870638A
• 公開（公告）日: 2015-08-26
• 發明（設計）人: R·R·博特;M·福卡拉基;R·霍梅斯;T·卡佩爾;B·R·凱萊門;S·克拉利;I·尼古拉耶夫;M·桑德格倫;J·范里朔特;S·范斯提格桑斯
• 申請（專利權）人: 丹尼斯科美國公司
• 主分類號: C12N9/24
• 分類號: C12N9/24;C12N9/42
• 代理公司: 北京市中咨律師事務所 11247
• 代理人: 凌立;黃革生

1.一種分離的親本纖維二糖水解酶(CBH)變體，其中所述變體具有纖維素酶活性，與SEQ?ID?NO:3具有至少80％序列同一性，并且在全水解產物酸預處理的玉米稈(whPCS)測定和稀氨玉米稈(daCS)測定中具有優于所述親本CBH酶的顯著改善的性能。

2.根據權利要求1所述的分離的變體，其中所述變體包含選自由以下各項組成的組的氨基酸置換：F418M、T246S、T255V以及其組合，其中各氨基酸置換的位置對應于SEQ?ID?NO:3。

3.根據權利要求2所述的分離的變體，其中所述變體包含F418M置換。

4.根據權利要求2或3所述的分離的變體，其中所述變體包含T246S置換。

5.根據權利要求2、3或4所述的分離的變體，其中所述變體包含T255V置換。

6.根據權利要求2、3或5所述的分離的變體，其中所述變體進一步包含氨基酸置換，所述氨基酸置換選自由以下各項組成的組：T246P和T246V。

7.根據權利要求2、3、4或6所述的分離的變體，其中所述變體進一步包含氨基酸置換，所述氨基酸置換選自由以下各項組成的組：T255D、T255I、T255K、T255P以及T255R。

8.根據權利要求2至7中任一項所述的分離的變體，其中所述變體進一步包含氨基酸置換，所述氨基酸置換選自由以下各項組成的組：D241N、G234D、S92T、T41I、G234D、P194V、N200G或N200R、N49P、Y247D、T356L以及其組合。

9.根據前述權利要求中任一項所述的分離的變體，其中所述親本CBH多肽為真菌纖維二糖水解酶1(CBH1)。

10.根據權利要求9所述的分離的變體，其中所述真菌CBH1是來自紅褐肉座菌(Hypocrea?jecorina)、施韋尼茲肉座菌(Hypocrea?schweinitzii)、東方肉座菌(Hypocrea?orientalis)、擬康氏木霉(Trichoderma?pseudokoningii)、康長木霉(Trichoderma?konilangbra)、桔綠木霉(Trichoderma?citrinoviride)、哈茨木霉(Trichoderma?harzanium)、棘孢曲霉(Aspergillus?aculeatus)、黑曲霉(Aspergillus?niger)、微紫青霉菌(Penicillium?janthinellum)、灰腐質霉(Humicola?grisea)、嗜熱色串孢(Scytalidium?thermophilum)或柄孢霉(Podospora?anderina)。

11.根據前述權利要求中任一項所述的分離的變體，其中所述親本CBH多肽與SEQ?ID?NO:3具有至少90％的序列同一性。

12.一種分離的多核苷酸，其包含編碼根據前述權利要求中任一項所述的親本CBH多肽變體的多核苷酸序列。

13.一種載體，其包含根據權利要求12所述的分離的多核苷酸。

14.根據權利要求13所述的載體，其中所述載體為表達載體。

15.一種宿主細胞，其包含根據權利要求12所述的分離的多核苷酸、根據權利要求13所述的載體或根據權利要求14所述的表達載體。

16.根據權利要求15所述的宿主細胞，其中所述宿主細胞為真菌細胞或細菌細胞。