[發明專利]具有靶向結合特異性的嵌合多肽有效

申請號：	201380057657.5	申請日：	2013-09-04
公開（公告）號：	CN104781404B	公開（公告）日：	2018-10-26
發明（設計）人：	卡洛斯·F·巴巴斯三世;安德魯·莫瑟;布萊恩·M·郎布;托馬斯·甲基	申請（專利權）人：	斯克利普斯研究院
主分類號：	C12N15/62	分類號：	C12N15/62
代理公司：	上海勝康律師事務所 31263	代理人：	樊英如;李獻忠
地址：	美國加利***	國省代碼：	美國;US
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摘要：
搜索關鍵詞：	具有靶向結合特異性嵌合多肽
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【權利要求書】：

1.一種分離的多肽，其包括黃單胞桿菌屬衍生的轉錄激活子樣效應因子(TALE)蛋白，所述TALE蛋白具有N-末端結構域(NTD)，所述N-末端結構域包括在N_-1發夾中的氨基酸序列VGKQWSGARAL，只是在所述氨基酸序列中的一個或多個突變選自：Q是Y、Q是S、Q是R、W是R、W是G、W缺失、S是R、S是H、S是A、S是N、以及S是T。

2.如權利要求1所述的多肽，其中所述NTD包含選自以下序列的氨基酸序列：VGKYRGARAL(SEQ ID NO:4)、VGKSRSGARAL(SEQ ID NO:5)、VGKYHGARAL(SEQ ID NO:6)和VGKRGAGARAL(SEQ ID NO:7)。

3.一種分離的多肽，其包含羅爾斯通菌屬衍生的合成的轉錄激活子樣效應因子(TALE)蛋白，所述TALE蛋白具有N-末端結構域(NTD)，所述N-末端結構域包含在N_-1發夾中的氨基酸序列IVDIAR₁QR₂SGDLA，只是在所述氨基酸序列中的一個或多個突變選自：R₁是K、Q是Y、Q是S、Q是R、R₂是W、R₂是G、R₂缺失、S是R、S是H、S是A、S是N、以及S是T。

4.如權利要求3所述的多肽，其中所述NTD包括選自以下序列的氨基酸序列：IVDIARQWSGDLA(SEQ ID NO:9)、IVDIARYRGDLA(SEQ ID NO:10)、IVDIARSRSGDLA(SEQ IDNO:11)、IVDIARYHGDLA(SEQ ID NO:12)和IVDIARRGAGDLA(SEQ ID NO:13)。

5.如權利要求1-4中任一項所述的多肽，其進一步包括重組酶結構域或核酸酶結構域。

6.如權利要求1-2中任一項所述的多肽，其中所述TALE蛋白衍生自AvrXa7、Tal1c或PthXol。

7.如權利要求1-2中任一項所述的多肽，其中所述TALE蛋白包含合成的RVD結構域。

8.如權利要求7所述的多肽，其中所述TALE蛋白包含C-末端截短和/或N-末端截短。

9.如權利要求7所述的多肽，其中所述TALE蛋白包括在殘基120、128或145處截短的AvrXa7 N-末端序列和/或在殘基28處截短的AvrXa7 C-末端序列。

10.如權利要求5所述的多肽，其中所述重組酶選自：Gin，Hin，Tn3，Sin，Beta，Pin，Min，Din，Cin，Gin p，Gin y，Gin 6，Gin e和Gin Z。

11.如權利要求10所述的多肽，其中所述重組酶是Gin。

12.如權利要求10所述的多肽，其中所述重組酶是Gin并且所述TALE蛋白是AvrXa7。

13.一種用于體外位點特異性重組的方法，其包括：

(a)提供包括用于與權利要求5所述的多肽特異性相互作用的至少兩個結合位點的DNA序列；以及

(b)使所述DNA序列與所述多肽發生反應，其中所述多肽催化與所述多肽特異性相互作用的兩個位點之間的位點特異性重組事件，在所述事件中，所述DNA序列的兩條鏈都被切割。

14.如權利要求13所述的方法，其中所述位點特異性重組事件是倒位。