[發明專利]用于增強甲醇存在下還原當量的可用性和產生相關的1,4-丁二醇的微生物和方法

在審

• 申請號: 201380054008.X
• 申請日: 2013-08-27
• 公開（公告）號: CN104736716A
• 公開（公告）日: 2015-06-24
• 發明（設計）人: A·P·博加德;羅賓·E·奧斯特豪特;S·J·萬殿;卡拉·安·特蕾西韋爾;普里蒂·法克雅;斯特凡·安德烈
• 申請（專利權）人: 基因組股份公司
• 主分類號: C12P7/18
• 分類號: C12P7/18;C07C31/18;C12N1/21
• 代理公司: 北京安信方達知識產權代理有限公司 11262
• 代理人: 鄭霞

1.一種具有甲醇代謝途徑(MMP)的非天然存在的微生物生物體(NNOMO)，其中所述生物體包含至少一種編碼MMP酶(MMPE)的外源性核酸，所述外源性核酸以足夠增強甲醇存在下還原當量的可用性的量表達，其中所述MMP包含：

(i)甲醇脫氫酶(EM9)；

(ii)EM9和甲醛活化酶(EM10)；或

(iii)甲醇甲基轉移酶(EM1)和亞甲基四氫葉酸還原酶(EM2)。

2.如權利要求1所述的生物體，其中：

(a)所述MMP包含：

(i)(a)EM9、亞甲基四氫葉酸脫氫酶(EM3)、次甲基四氫葉酸環水解酶(EM4)和甲酰四氫葉酸脫甲酰酶(EM5)；(b)EM9、EM3、EM4和甲酰四氫葉酸合成酶(EM6)；(c)EM9和甲醛脫氫酶(EM11)；(d)EM9、S-(羥基甲基)谷胱甘肽合酶(EM12)、谷胱甘肽依賴性甲醛脫氫酶(EM13)和S-甲酰谷胱甘肽水解酶(EM14)；或(e)EM9、EM13和EM14；

(ii)(a)EM9、EM10、EM3、EM4和EM5；(b)EM9、EM10、EM3、EM4和EM6；或

(iii)(a)EM1、EM2、EM3、EM4和EM5；或(b)EM1、EM2、EM3、EM4和EM6；

其中所述MMP任選地進一步包含甲酸脫氫酶(EM8)、甲酸氫裂合酶(EM15)或氫化酶(EM16)；和/或

其中所述生物體任選地包含兩種、三種、四種、五種、六種或七種外源性核酸，每一種都編碼MMPE。

3.如權利要求1或2所述的生物體，其進一步包含1,4-丁二醇(BDO)途徑，其中所述生物體包含至少一種編碼BDO途徑(BDOP)酶的外源性核酸，所述外源性核酸以足夠產生BDO的量表達，并且其中所述BDOP包含：

(i)丁二酰基-CoA還原酶(形成醛)(EB3)、4-羥基丁酸(4-HB)脫氫酶(EB4)、4-HB激酶(EB5)、轉磷酸-4-羥基丁酰酶(EB6)、4-羥基丁酰基-CoA還原酶(形成醛)(EB7)和1,4-丁二醇脫氫酶(EB8)；

(ii)EB3、EB4、4-羥基丁酰基-CoA轉移酶(EB11)或4-羥基丁酰基-CoA合成酶(EB12)、EB7和EB8；

(iii)EB3、EB4、EB11或4-羥基丁酰基-CoA合成酶和4-羥基丁酰基-CoA還原酶(形成醇)(EB15)；

(iv)EB3、EB4、EB5、EB6和EB15；

(v)EB3、EB4、4-HB還原酶(EB13)和EB8；

(vi)EB3、EB4、EB5、4-羥基丁酰基-磷酸還原酶(EB14)和EB8；

(vii)丁二酰基-CoA還原酶(形成醇)(EB10)、EB5、EB6、EB7和EB8；

(viii)EB10、EB5、EB6和EB15；

(ix)EB10、EB11或EB12、EB7和EB8；

(x)EB10、EB11或EB12和EB15；

(xi)EB10、EB13和EB8；

(xii)EB10、EB5、EB14和EB8；

(xiii)丁二酸還原酶(EB9)、EB4、EB5、EB6、EB7和EB8；

(xiv)EB9、EB4、EB11或EB12、EB7和EB8；

(xv)EB9、EB4、EB11或EB12和EB15；

(xvi)EB9、EB4、EB5、EB6和EB15；

(xvii)EB9、EB4、EB13和EB8；以及

(xviii)EB9、EB4、EB5、EB14和EB8；

其中所述BDOP任選地進一步包含丁二酰基-CoA轉移酶(EB1)或丁二酰基-CoA合成酶(EB2A)；和/或

其中所述生物體任選地包含四種、五種、六種或七種外源性核酸，每一種都編碼BDOP酶。