[發(fā)明專利]用于檢測生物組分的方法和系統(tǒng)在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 201380053258.1 | 申請日： | 2013-08-12 |
| 公開（公告）號： | CN104736725A | 公開（公告）日： | 2015-06-24 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | A·R·阿貝特;D·J·伊斯特本;A·R·夏穆比 | 申請（專利權(quán)）人： | 加利福尼亞大學董事會 |
| 主分類號： | C12Q1/68 | 分類號： | C12Q1/68;F04B13/00;C12M1/34;C12P19/34 |
| 代理公司： | 上海專利商標事務(wù)所有限公司 31100 | 代理人： | 余穎;沈端 |
| 地址： | 美國加利*** | 國省代碼： | 美國;US |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 用于 檢測 生物 組分 方法 系統(tǒng) | ||
1.一種用于檢測細胞的方法，所述方法包括：
將獲自受試者的生物樣本的細胞封裝在微滴中，其中在所述微滴中存在至少一個細胞；
在有效使細胞裂解的條件下孵育所述微滴；
將聚合酶鏈式反應(yīng)(PCR)試劑、檢測組分和多個PCR引物引入所述微滴中并在允許PCR擴增的條件下孵育所述微滴以產(chǎn)生PCR擴增產(chǎn)物，其中所述多個PCR引物包括各自與一種或多種寡核苷酸雜交的一個或多個引物；以及
通過所述檢測組分的檢測來檢測所述PCR擴增產(chǎn)物的存在或不存在，其中檢測到所述檢測組分指示PCR擴增產(chǎn)物的存在；
其中一個或多個步驟在微流體控制下進行。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中在有效使細胞裂解的條件下孵育所述微滴包括將裂解劑引入所述微滴中。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其中所述一種或多種寡核苷酸是致癌基因。
4.根據(jù)權(quán)利要求1-3中任一項所述的方法，其中所述生物樣本是血液并且所述方法包括至少部分地基于其中檢測到PCR擴增產(chǎn)物的微滴的數(shù)目來確定所述受試者的血液樣本中存在的循環(huán)腫瘤細胞(CTC)的數(shù)目。
5.根據(jù)權(quán)利要求1-4中任一項所述的方法，其中所有步驟都在微流體控制下進行。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其中所有步驟都在相同的微流體裝置上進行。
7.根據(jù)上述權(quán)利要求中任一項所述的方法，其中所述多個PCR引物包括10個或更多個引物。
8.根據(jù)上述權(quán)利要求中任一項所述的方法，其中所述多個PCR引物包括20至100個引物。
9.根據(jù)上述權(quán)利要求中任一項所述的方法，其中所述多個PCR引物包括10種或更多種致癌基因的引物。
10.根據(jù)上述權(quán)利要求中任一項所述的方法，其中在允許PCR擴增的條件下孵育所述微滴在與封裝所述細胞并裂解所述細胞所用相同的微流體裝置上進行。
11.根據(jù)上述權(quán)利要求中任一項所述的方法，其中所述PCR試劑和PCR引物與所述裂解劑同時加入。
12.根據(jù)上述權(quán)利要求中任一項所述的方法，其中所述PCR試劑在兩個步驟或更多個步驟中加入。
13.根據(jù)上述權(quán)利要求中任一項所述的方法，其進一步包括將探針引入所述微滴中。
14.根據(jù)權(quán)利要求13所述的方法，其中所述探針在允許PCR擴增的條件下孵育所述微滴之前引入。
15.根據(jù)權(quán)利要求13或14所述的方法，其中所述探針是探針。
16.根據(jù)上述權(quán)利要求中任一項所述的方法，其中試劑通過將所述微滴與包含所述試劑的第二微滴合并而加入所述微滴中。
17.根據(jù)上述權(quán)利要求中任一項所述的方法，其中試劑使用小滴聚結(jié)或皮可注射而加入所述微滴中。
18.根據(jù)上述權(quán)利要求中任一項所述的方法，其中試劑通過包括下述步驟的方法加入所述微滴中：
d)將所述試劑乳化成小滴流，其中所述小滴小于所述微滴的尺寸；
e)使所述小滴與所述微滴一起流動；以及
f)合并小滴與所述微滴。
19.根據(jù)權(quán)利要求18所述的方法，其中所述小滴的直徑為所述微滴的直徑的25％或更小，并且多個小滴與所述微滴合并。
20.根據(jù)權(quán)利要求18或19所述的方法，其中所述合并包括施加電場。
21.根據(jù)上述權(quán)利要求中任一項所述的方法，其中試劑通過包括下述步驟的方法加入所述微滴中：
d)將所述試劑噴射至流體射流中；
e)使所述流體射流與所述微滴并排流動；以及
f)合并小滴與所述微滴。
22.根據(jù)權(quán)利要求21所述的方法，其中合并包括施加電場。
23.根據(jù)權(quán)利要求21或22所述的方法，其中所述試劑的噴射包括加入增粘劑或表面活性劑。
24.根據(jù)上述權(quán)利要求中任一項所述的方法，其中試劑通過包括使用注射至所述微滴中的流體作為電極的方法而加入所述微滴中。
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