[發明專利]作為轉染試劑的羧化多胺衍生物

有效

• 申請號: 201380052457.0
• 申請日: 2013-10-02
• 公開（公告）號: CN104703629B
• 公開（公告）日: 2020-12-01
• 發明（設計）人: 斯特芬·潘茨納;克里斯汀·賴因施;沃克瑪·溫迪施;克里斯蒂娜·德雷爾
• 申請（專利權）人: 生物技術傳送科技有限責任公司
• 主分類號: A61K47/54
• 分類號: A61K47/54;A61K47/59;A61K47/64
• 代理公司: 隆天知識產權代理有限公司 72003
• 代理人: 吳小瑛;張福根

本發明提供多胺衍生物，多胺衍生物用于將聚陰離子轉染至細胞中的用途，以及利用聚陰離子轉染細胞的方法，該方法包括將所述聚陰離子與多胺衍生物例如在緩沖液中混合，以及利用在先前步驟中得到的混合物處理所述細胞。

發明領域

本發明涉及多胺衍生物以及多胺衍生物用于將核酸和其它聚陰離子轉染至細胞中的用途。本發明還涉及一種用于將聚陰離子轉染至細胞中的方法，以及涉及用于此的試劑盒和多胺衍生物。本發明的多胺衍生物是有效的轉染劑(transfectants)，具有非常低的毒性，可用于轉染多種不同的細胞類型。

背景技術

轉染是將外源物質引入至細胞中。在轉染的背景之下，“至細胞中”意指運輸外源物質穿過至少一層生物膜。可進一步運輸至細胞區室或細胞器中。相比之下，僅僅是將物質包含在核內體、胞飲或吞噬小泡或者溶酶體中不被認為是轉染。

外源物質可包含諸如肽、蛋白質以及各種類型的核酸的分子；后者可小至如寡核苷酸或者長至如質粒。外源物質也可包含此類分子的裝配物(assemblies)。在任何情況下，上述分子或裝配物是大的且親水的，這兩個特征阻礙了它們獨力的細胞攝取。因此轉染需要使用特定的輔助試劑。除其它之外，多胺可為此類試劑。多胺在溶液中形成聚陽離子，促進與諸如核酸的聚陰離子的復合物(complex)形成。這些復合物是實際的能勝任轉染的實體(transfection competent entities)。

Boussif等人(Proc Natl Acad Sci USA(1995),92(16)：7297-7301)或者在US6013240中)使用支鏈的聚亞乙基亞胺(polyethyleneimine，PEI)作為多胺，證明了多胺和質粒的復合物的轉染。在持續該觀念的同時，其他人試圖通過各種手段來改進該技術。改進轉染劑的策略包括：

(i)選擇特定尺寸或構型的聚陽離子，例如具有特定長度的直鏈的PEI(WO2009/016507)；

(ii)使用此類聚陽離子的在代謝上不穩定的多聚體(Gosselin等人(2001)Bioconj Chem,12(6)：989-994；Lynn等人(2001)J Am Chem Soc 123(33)：8155-8156；等人的WO2007/020060；Tanaka等人的WO2007/120479)；

(iii)使用脂質混合物(Monahan等人的US7,601,367)；或者

(iv)對聚合物主鏈進行化學改性，例如芳香族氨基酸的接枝(在Adib等人的WO2009/074970中)、組氨酸或咪唑基團的接枝(在WO2009/011402中)、如Wakefield等人(2005)Bioconj Chem 16(5)：1204-1208中的烷基化或者利用膽固醇的改性(在Ferguson等人的US2007/0154447中)。

疏水改性改善了轉染劑的膜滲透(見于Wakefield等人)，但與溶液中的復合物的低穩定性相關；配制的材料傾向于形成聚集體。聚乙二醇(PEG)的接枝(通過Matar等人在WO2009/021017中或者在Rozema等人(2007)Proc Natl Acad Sci USA 104(32)：12982-12987中)抵制聚集，但另一方面其與生物活性對抗且必須為可逆的，如Rozema的發表文獻中所示。

從許多不同的策略以及從大量的報告中顯而易見的是，新型轉染劑的開發是深入研究的課題。它們的應用具有重大的商業意義；轉染試劑在2011年具有約200Mio USD的市場容量(FrostSullivan，Global Transfection Markets(全球轉染市場)，N6F0-01)。