[發明專利]能夠結合到并且中和B型肝炎病毒的人類結合分子及其用途

在審

• 申請號: 201380050113.6
• 申請日: 2013-09-24
• 公開（公告）號: CN104662041A
• 公開（公告）日: 2015-05-27
• 發明（設計）人: I·范德尼烏文霍弗;M·范德內特科夫舍坦;C·A·阿佩特里;R·H·E·弗里森
• 申請（專利權）人: 克魯塞爾荷蘭公司
• 主分類號: C07K16/08
• 分類號: C07K16/08
• 代理公司: 永新專利商標代理有限公司 72002
• 代理人: 左路

發明領域

本發明涉及醫學。本發明具體來說涉及能夠結合到并且中和B型肝炎病毒的人類結合分子，例如單克隆抗體或其抗原結合片段。另外，本發明涉及對由B型肝炎病毒引起的感染進行診斷、預防和/或治療。

發明背景

B型肝炎病毒(HBV)在世界范圍內已經感染了多于20億人并且造成暫時性和慢性肝病。盡管在1982年引入一種針對HBV的疫苗，但在全球范圍內3.5億人受慢性感染。慢性感染的風險與患者在感染時的年齡相關。感染在約90％的在生下來后第一年期間感染的嬰兒中持續。相比之下，感染僅在1％-5％的作為成人感染的患者中持續。

HBV的活性復制的特征在于肝損傷，最可能是由于免疫反應性。慢性HBV感染可以導致肝癌和死亡。約25％的在兒童時期變得慢性感染的成人死于HBV相關的肝硬化或癌癥，每年估計有500000-120萬人。

對HBV的免疫反應由用于消除HBV感染的細胞的細胞免疫反應以及促進循環病毒顆粒清除的體液抗體反應兩者組成。引起對中和HBV抗體進行誘發的主要病毒組分是小HBV表面抗原(HBsAg)。

所有重組疫苗都含有HBsAg并且這些疫苗的功效高(在多于95％的嬰兒、兒童以及年輕人中進行保護)并且長效(>20年)。另外，所有疫苗都引發跨越血清型的免疫性。HBsAg由226個氨基酸組成，有一個N-鍵聯的糖基化位點。循環HBV病毒株的比較已經顯示，不同HBsAg序列之間存在高水平均一性。

市場上存在用于治療慢性HBV感染的不同抗病毒產品。然而，可用的抗病毒藥物中無一者可以清除感染；它們僅抑制復制因此最小化肝損傷。因此，肝移植是具有HBV末期肝病的患者的唯一治療選擇。在美國估計HBV患病的肝相當于所有肝移植的5％，而在中國所有肝移植中有約85％是由于HBV感染。

為防止新的肝在肝移植之后再感染，當前用多克隆HBV免疫球蛋白(HBIg)與一種抗病毒劑組合治療患者。多克隆HBIg由來自免疫的供體的匯集的血漿制備并且還或者單獨或者與一種疫苗組合用作暴露后預防。HBIg制劑經指示用于治療急性暴露于含有HBsAg的血液、HBsAg陽性母親所生嬰兒的圍產期暴露、性暴露于HBsAg陽性人員以及家庭暴露于具有急性B型肝炎病毒感染的人員。因為存在一些與HBIg相關的限制，如可用性、制品成本、大注射體積、不良事件以及血液傳播感染的風險，所以對于一種針對HBV的單克隆抗體產品存在醫療需要。

先前已經描述了數種針對HBV的單克隆抗體。PCT專利申請PCT/IL97/00183和PCT/IL97/00184分別披露了針對HBV表面抗原的人類單克隆抗體mAb?17.1.41和mAb?19.79.5。這些抗體結合到不同的HBV亞型。然而，亞型adw2(C基因型)的HBsAg不被所述抗體識別(埃倫(Eren)等人，2000，《肝臟病學》(Hepatology)32,588)。C基因型在中國非常普遍，大多數慢性感染的個體屬于其中。

PCT專利申請WO?2009069917披露了一種能夠中和B型肝炎病毒的人類抗體，用于預防和治療B型肝炎感染。尚未證實此抗體結合到HBV的所有主要血清型和基因型。另外，迄今披露的抗體中無一者已經顯示可中和大多數通常已知的疫苗誘導性和抗病毒誘導性逃逸突變體。

因此，在本領域中需要除了可能的逃逸突變體之外結合并且中和HBV的廣泛的血清型和基因型并且可以大工業規模制造的抗體。

發明內容

本發明提供了能夠特異性結合到并且中和B型肝炎病毒(HBV)的結合分子、具體來說是人類結合分子。本發明提供了結合到HBV的主要血清型和基因型、由此提供廣泛保護的結合分子。另外，根據本發明的結合分子結合到所有主要疫苗誘導性和抗病毒誘導性HBV逃逸突變體。最終，本發明的針對HBV的結合分子可以大規模高效制造，這使其適于工業生產。

根據本發明的結合分子包含：一個重鏈CDR1，包含SEQ?ID?NO:1的氨基酸序列；一個重鏈CDR2，包含SEQ?ID?NO:2的氨基酸序列；一個重鏈CDR3，包含SEQ?ID?NO:3的氨基酸序列；一個輕鏈CDR1，包含SEQ?ID?NO:4的氨基酸序列；一個輕鏈CDR2，包含SEQ?ID?NO:5的氨基酸序列；以及一個輕鏈CDR3，包含SEQ?ID?NO:6的氨基酸序列。

在某一實施例中，本發明的結合分子包含：一個重鏈可變區，包含SEQ?ID?NO:7的氨基酸序列；和一個輕鏈可變區，包含SEQ?ID?NO:8的氨基酸序列。