[發明專利]通過超聲空化從脂肪組織分離干細胞及使用方法

在審

• 申請號: 201380044693.8
• 申請日: 2013-06-26
• 公開（公告）號: CN104704111A
• 公開（公告）日: 2015-06-10
• 發明（設計）人: 拉爾夫·布萊特;佩林·布萊特;布魯斯·漢森;韋恩·托馬斯
• 申請（專利權）人: 安柏定企業有限公司;他唯帝企業有限公司
• 主分類號: C12N5/0775
• 分類號: C12N5/0775;C12N13/00
• 代理公司: 北京清亦華知識產權代理事務所(普通合伙) 11201
• 代理人: 宋融冰

相關申請的交叉引用

本申請要求2012年6月26日提交的申請號為2012902719的澳大利亞臨時專利申請的優先權，其全部內容通過引用并入本文。

技術領域

本發明涉及利用干細胞制品的方法。

開發本發明主要用于從脂肪組織非酶分離間質細胞/干細胞并且參考該應用在下文中進行描述。然而，應當理解的是本發明不限于該特定使用領域。

背景技術

在整個說明書中現有技術的任何討論決不應被認為，承認這樣的現有技術是廣為人知的或形成本領域的公知常識的一部分。

脂肪組織，除了包含成熟的脂肪細胞之外，還包括能夠分化為各種細胞譜系的干細胞(Zuk等Tissue?Eng.2001；7:211-228；Hicok等Tissue?Eng.2004；10:371-380；Erickson等Biochem?Biophys?Res?Commun.2002；290:763-769；Cousin等Biochem?Biophys?Res?Commun.2003；301:1016-1022；Safford等Biochem?Biophys?Res?Commun.2002；294:371-379；Miranville等Circulation.2004；1?10:349-355；Planat-Benard等Circ?Res.2004；94:223-229；Planat-Benard等Circulation.2004；1?09:656-663)。干細胞是粘著的并且可以在培養物中增殖。相應地，從少量的脂肪組織中能夠獲得大量的干細胞。

現在，為了從脂肪組織分離干細胞，典型地使用酶類(諸如膠原酶)溶解將脂肪組織保持在一起的膠原中的鍵。(見例如，Zuk,等Mol?Biol?Cell.2002；13：4279-4295；Zuk,等Tissue?Eng.2001；7：211-228)。雖然膠原酶是有效的，但其不適于制備干細胞，因為：

·酶處理導致高水平的細胞死亡，由此減少被分離的干細胞的數量和導致更多的細胞碎片；

·酶可以損傷和破壞獨特的細胞類型；

·分離的干細胞被酶污染可以使它們不適于移植；以及

·監管機構可考慮在干細胞的分離中酶的使用導致需要藥物批準的細胞產物。

本發明的目的在于克服或改善現有技術中的至少一個缺點，或提供一種有用的替代方案。

發明內容

令人驚訝地，本發明的發明人發現用超聲空化處理脂肪組織可破碎脂肪組織和溶解成熟的脂肪細胞，產生包含可存活的干細胞/間質細胞的間質血管成分和細胞外基質。

一方面，本發明涉及從脂肪組織分離包括可存活的間質細胞/干細胞的間質血管成分和細胞外基質，方法包括用超聲空化使用足以破碎組織和溶解成熟的脂肪細胞，同時保持間質細胞/干細胞的生存能力的時間、振幅和周期處理脂肪組織。

超聲空化振幅和周期設置可以是可變的且取決于脂肪組織的量和工藝周期以便保持細胞生存能力。不應該超過細胞生存能力的溫度范圍。

另一方面，在超聲空化期間，脂肪組織的溫度保持在確保間質細胞/干細胞的生存能力的溫度。

另一方面，脂肪組織的溫度不超過約43℃至約45℃。

另一方面，用振幅設置為約20％至約75％及周期設置為約0.2至約0.9的超聲設備用超聲空化處理脂肪組織約10秒至約10分鐘期間。

另一方面，在脂肪組織中放置超聲空化設備探針，振幅設置為約50％，周期設置為約0.4至約0.5，并且穿過脂肪組織而升降探針約1分30秒至約1分40秒；并且，其中脂肪組織的溫度保持在低于約43℃至約45％的溫度。

另一方面，本發明涉及根據本發明的方法分離的包括可存活的干細胞的間質血管成分。

另一方面，間質血管成分除了干細胞之外還包括可存活的細胞。

另一方面，本發明涉及根據本發明的方法分離的脂肪組織來源的干細胞。

另一方面，本發明涉及一種治療受試者骨關節炎、關節相關的炎癥性疾病、炎癥性關節炎疾病、軟組織損傷或撕裂、軟骨障礙、骨病、自身免疫性疾病、肌營養不良、慢性疲勞、肺病癥、肺炎癥性疾病、神經系統失調、脊柱病癥或神經障礙的方法，包括將根據本發明的脂肪組織來源的間質細胞/干細胞制劑給藥至受試者。