[發(fā)明專(zhuān)利]藥物遞送蛋白質(zhì)的增強(qiáng)運(yùn)輸?shù)耐蛔凅w的分離

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201380041215.1
• 申請(qǐng)日: 2013-08-02
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN104619839A
• 公開(kāi)（公告）日: 2015-05-13
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 拉里·K·梅迪納-考維
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 西塞醫(yī)療中心
• 主分類(lèi)號(hào): C12N15/00
• 分類(lèi)號(hào): C12N15/00
• 代理公司: 北京銀龍知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11243
• 代理人: 鐘晶;於毓楨

1.一種增強(qiáng)運(yùn)輸至細(xì)胞的方法，包括：

提供組合物，所述組合物包括具有增強(qiáng)進(jìn)入至細(xì)胞的一個(gè)或多個(gè)突變的五鄰體基質(zhì)(PB)蛋白；以及

將有效劑量的所述組合物施用至所述細(xì)胞。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述一個(gè)或多個(gè)突變是111C和/或333F。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述組合物靶向至所述細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)和/或細(xì)胞核。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述組合物進(jìn)一步包括治療性藥物。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述細(xì)胞是腫瘤細(xì)胞。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述一個(gè)或多個(gè)突變是SEQ?ID?NO：1、SEQ?ID?NO：2、SEQ?ID?NO：3、SEQ?ID?NO：4、SEQ?ID?NO：5、SEQ?ID?NO：6、SEQ?ID?NO：7、SEQ?ID?NO：8、SEQ?ID?NO：9、SEQ?ID?NO：10、SEQ?ID?NO：11、SEQ?ID?NO：12、SEQ?ID?NO：13、SEQ?ID?NO：14、SEQ?ID?NO：15、SEQ?ID?NO：16、SEQ?ID?NO：17、SEQ?ID?NO：18、SEQ?ID?NO：19和/或SEQ?ID?NO：20。

7.一種生產(chǎn)靶向至細(xì)胞器的藥物遞送分子的方法，其包括：

a.獲得編碼五鄰體基質(zhì)(PB)基因的多核苷酸，并產(chǎn)生所述多核苷酸的突變體；

b.將突變的多核苷酸克隆至噬菌體載體，并產(chǎn)生包括所述噬菌體載體的噬菌體文庫(kù)；

c.用所述噬菌體文庫(kù)轉(zhuǎn)化細(xì)胞；

d.分級(jí)分離所述轉(zhuǎn)化的細(xì)胞，并從所述轉(zhuǎn)化的細(xì)胞收獲細(xì)胞器；

e.擴(kuò)增來(lái)自所述收獲的細(xì)胞器的噬菌體；

f.用擴(kuò)增后的來(lái)自所述收獲的細(xì)胞器的噬菌體轉(zhuǎn)化細(xì)胞；

g.重復(fù)步驟(d)、(e)、(f)和(g)；

h.滴定來(lái)自每輪的所述收獲的細(xì)胞器的所述噬菌體；

i.選擇具有最高滴度的噬菌體，并從所述噬菌體獲得所述突變的多核苷酸的序列；以及

j.產(chǎn)生由所述序列編碼的多肽，

其中，所述多肽是所述靶向至細(xì)胞器的藥物遞送分子。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其中所述細(xì)胞器選自由線粒體、高爾基體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、細(xì)胞核、核糖體、質(zhì)膜和胞質(zhì)溶膠所組成的組。

9.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其中所述細(xì)胞是哺乳動(dòng)物細(xì)胞或非哺乳動(dòng)物細(xì)胞。

10.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其中使用下述的任何一種或多種產(chǎn)生突變體：基于PCR的方法、化學(xué)誘變、紫外線誘導(dǎo)的誘變或其組合。

11.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其中所述藥物遞送分子包括靶向結(jié)構(gòu)域、核內(nèi)體裂解配體結(jié)構(gòu)域和帶正電荷的結(jié)構(gòu)域。

12.一種用于將治療劑遞送至細(xì)胞器的載體，其包括由增強(qiáng)進(jìn)入至細(xì)胞的一個(gè)或多個(gè)五鄰體基質(zhì)(PB)突變編碼的多肽。

13.根據(jù)權(quán)利要求12所述的載體，其中所述一個(gè)或多個(gè)五鄰體基質(zhì)(PB)突變包括111C和/或333F。

14.根據(jù)權(quán)利要求12所述的載體，進(jìn)一步包括聚賴(lài)氨酸模體。

15.根據(jù)權(quán)利要求12所述的載體，進(jìn)一步包括調(diào)蛋白的靶向結(jié)構(gòu)域。

16.根據(jù)權(quán)利要求12所述的載體，其中所述一個(gè)或多個(gè)五鄰體基質(zhì)突變包括C-末端缺失。

17.一種治療劑，其包括權(quán)利要求12所述的載體、以及治療性藥物。

18.根據(jù)權(quán)利要求17所述的治療劑，其中所述治療性藥物是化學(xué)治療劑。