[發明專利]活性染色方法

有效

• 申請號: 201380035736.6
• 申請日: 2013-05-02
• 公開（公告）號: CN104662425B
• 公開（公告）日: 2017-10-10
• 發明（設計）人: 埃里克·斯廷普森
• 申請（專利權）人: 查爾斯河實驗室公司
• 主分類號: C12Q1/04
• 分類號: C12Q1/04
• 代理公司: 北京泛誠知識產權代理有限公司11298
• 代理人: 吳立,文琦

1.一種檢測樣品中的活微生物的方法，該方法包括以下步驟：

(a)將所述樣品中的如果存在的微生物(i)在允許可透過膜的結合核酸的熒光染料滲透活微生物與非活微生物兩者的條件下，暴露于該熒光染料，并且(ii)在允許不可透過膜的結合核酸的熒光淬滅劑選擇性地滲透非活微生物而不是活微生物的條件下，暴露于該淬滅劑，該淬滅劑能淬滅由所述熒光染料產生的熒光，其中所述熒光染料和所述熒光淬滅劑結合至所述非活微生物內的核酸形成基本上非熒光的復合物；

(b)在步驟(a)之后，將所述微生物暴露于具有一波長的光，該波長能夠激發所述熒光染料產生熒光發射；并且

(c)用檢測器對來自所述微生物的如果存在的熒光發射進行檢測，其中，與在所述活微生物中的熒光染料相比，在所述非活微生物中的熒光染料發射顯著更少的熒光，由此檢測所述樣品中的所述活微生物。

2.一種檢測樣品中的活微生物的方法，該方法包括以下步驟：

(a)將所述樣品中的如果存在的微生物(i)在允許可透過膜的結合核酸的熒光染料滲透活微生物與非活微生物兩者的條件下，暴露于該熒光染料，并且(ii)在允許不可透過膜的結合核酸的熒光淬滅劑選擇性地滲透非活微生物而不是活微生物的條件下，暴露于該淬滅劑，該淬滅劑能淬滅由所述熒光染料產生的熒光，其中所述熒光染料的發射光譜與所述熒光淬滅劑的吸收光譜重疊，使得當所述熒光染料和所述熒光淬滅劑兩者結合至所述非活微生物內的核酸形成復合物時，所述復合物在暴露于具有能夠激發所述熒光染料產生熒光發射的波長的光時是基本上非熒光的；

(b)在步驟(a)之后，將所述微生物暴露于具有一波長的光，該光能夠激發所述熒光染料產生熒光發射；并且

(c)用檢測器對來自所述微生物的如果存在的熒光發射進行檢測，該檢測器被配置為優先檢測來自所述熒光染料的可檢測發射而不是來自所述淬滅劑的可檢測發射，從而使得來自所述淬滅劑的可檢測發射如果產生的話不高于來自所述熒光染料的可檢測發射的50％，其中，與所述活微生物相比，所述非活微生物發射由所述檢測器檢測到的顯著更少的熒光，由此檢測所述樣品中的所述活微生物。

3.如權利要求2所述的方法，其中，來自所述淬滅劑的可檢測發射如果產生的話不高于來自所述熒光染料的可檢測發射的30％。

4.如權利要求1或2所述的方法，其中，所述淬滅劑在暴露于步驟(b)中的光時不發射可由所述檢測器檢測到的熒光事件。

5.如權利要求1或2所述的方法，其中，在步驟(a)中，所述微生物暴露于所述熒光染料并且然后暴露于所述熒光淬滅劑。

6.如權利要求1或2所述的方法，其中，在步驟(a)中，所述微生物同時暴露于所述熒光染料和所述熒光淬滅劑。

7.如權利要求1或2所述的方法，其中，所述熒光染料和所述熒光淬滅劑在所述微生物內與彼此結合。

8.如權利要求1或2所述的方法，其中，在步驟(a)期間，多種不同的熒光染料暴露于所述微生物。

9.如權利要求1或2所述的方法，其中，在步驟(a)期間，多種不同的熒光淬滅劑暴露于所述微生物。

10.如權利要求1或2所述的方法，其中，所述非活微生物在暴露于所述光時基本上不發射可由所述檢測器檢測到的熒光。

11.如權利要求1或2所述的方法，其中，所述非活微生物在暴露于所述光時基本上不發射熒光。

12.如權利要求1或2所述的方法，其中，在步驟(b)期間，具有所述能夠激發所述熒光染料的波長的所述光具有處于從350nm至1000nm范圍內的波長。

13.如權利要求12所述的方法，其中，所述波長至少在從350nm至600nm和從600nm至750nm的范圍內。

14.如權利要求1或2所述的方法，其中，在步驟(c)中，所述熒光發射是在從350nm至1000nm波長范圍內被檢測到。

15.如權利要求14所述的方法，其中，所述熒光發射是在選自以下的至少一個范圍內被檢測到：從350nm至450nm、從450nm至550nm、從550nm至650nm、從650nm至750nm、從750nm至850nm、以及從850nm至950nm。