[發明專利]NADP依賴性丙氨酸脫氫酶

無效

• 申請號: 201380030225.5
• 申請日: 2013-04-16
• 公開（公告）號: CN104350147A
• 公開（公告）日: 2015-02-11
• 發明（設計）人: T.哈斯;J.C.普費弗;A.斯克拉;A.萊希納;A.雅拉施
• 申請（專利權）人: 贏創工業集團股份有限公司
• 主分類號: C12N9/00
• 分類號: C12N9/00;C12P13/06;C12P7/24;C12N9/06
• 代理公司: 中國專利代理(香港)有限公司 72001
• 代理人: 周鐵;林森

1.細胞，其包含

含有枯草芽孢桿菌（Bacillus?subtilis）丙氨酸脫氫酶的氨基酸序列或其變體的多肽，其中Leu197或位于氨基酸序列中的同源位置的氨基酸交換為具有帶正電的側鏈的氨基酸，

或含有編碼所述多肽的核苷酸序列的核酸分子。

2.產生丙氨酸或通過丙氨酸消耗生成的化合物的方法，其包括步驟：

c)?通過將丙酮酸與權利要求1的細胞或

與含有枯草芽孢桿菌（Bacillus?subtilis）丙氨酸脫氫酶的氨基酸序列或其變體的多肽接觸，其中Leu197或位于氨基酸序列中的同源位置的氨基酸交換為具有帶正電的側鏈的氨基酸，使丙酮酸與銨和NADPH反應以產生丙氨酸。

3.權利要求2的方法，其還包括

a)?通過在NADP⁺存在的情況下與NADP⁺依賴性醇脫氫酶接觸而使伯醇或仲醇反應以產生醛或酮。

4.權利要求1-3中任一項的方法，其還包括

b)?通過丙氨酸存在的情況下與氨基轉移酶接觸而使步驟a）中制備的醛或酮反應以產生胺。

5.權利要求2-4中任一項的方法，其中步驟a）、b）和c）在相同反應混合物中進行，優選同時進行。

6.權利要求3-5中任一項的細胞或方法，其中所述細胞還表達NADP⁺依賴性醇脫氫酶。

7.權利要求3-6中任一項的細胞或方法，其中所述細胞還表達氨基轉移酶。

8.權利要求1-7中任一項的細胞或方法，其中，在多肽細胞中，所有選自多肽、NADP⁺依賴性醇脫氫酶和氨基轉移酶的酶胞內定位表達。

9.權利要求6-8中任一項的細胞或方法，其中所述NADP⁺依賴性醇脫氫酶為選自來自大腸桿菌的醇脫氫酶(YjgB,?數據庫編號ZP_07117674,?和YahK,?數據庫編號BAE76108.1)和來自青枯菌屬種（Ralstonia?sp.）的醇脫氫酶(SEQ?ID?No.?10)的NADP⁺依賴性醇脫氫酶，優選來自青枯菌屬種的醇脫氫酶(SEQ?ID?No.?10)或其變體。

10.權利要求7-9中任一項的細胞或方法，其中所述氨基轉移酶為選自來自青紫色素桿菌（Chromobacterium?violaceum）(數據庫編號NP_901695)、惡臭假單胞菌（Pseudomonas?putida）(數據庫編號YP_001668026)、惡臭假單胞菌（Pseudomonas?putida）(數據庫編號YP_001668026.1或YP_001671460)；類球紅細菌（Rhodobacter?sphaeroides）(菌株ATCC?17023；數據庫編號YP_353455)的氨基轉移酶及其變體，優選為來自青紫色素桿菌的氨基轉移酶(數據庫編號NP_901695)。

11.權利要求1-10中任一項的細胞或方法，其中所述具有帶正電的側鏈的氨基酸為精氨酸。

12.權利要求1-11中任一項的細胞或方法，其中另外地Asp196或位于氨基酸序列中的同源位置的氨基酸交換為具有中性的或帶正電的側鏈的氨基酸。

13.權利要求1-12中任一項的細胞或方法，其中所述具有中性的或帶正電的側鏈的氨基酸為選自丙氨酸、甘氨酸、絲氨酸和半胱氨酸的氨基酸，優選丙氨酸。

14.權利要求1-13中任一項的細胞或方法，其中所述多肽為SEQ?ID?No.?1中顯示的多肽。

15.權利要求1-14中任一項的細胞或方法，其中所述核苷酸序列為SEQ?ID?No.?2中顯示的核苷酸序列。

16.權利要求1-15中任一項的細胞或方法，其中所述核酸分子為包含核酸分子的載體。