[發(fā)明專利]多價(jià)重組禽皰疹病毒和用于免疫禽類的疫苗

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201380028558.4
• 申請(qǐng)日: 2013-03-29
• 公開（公告）號(hào): CN104364381B
• 公開（公告）日: 2020-07-28
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 由美·藤澤亞;真由美·久保村;咲子·佐伯;修治·齋藤
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 法國(guó)詩(shī)華動(dòng)物保健公司
• 主分類號(hào): C12N15/869
• 分類號(hào): C12N15/869;A61K39/17;A61K39/12
• 代理公司: 北京友聯(lián)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11343
• 代理人: 尚志峰;汪海屏

本發(fā)明涉及一種重組禽類皰疹病毒，其包含至少兩個(gè)重組核苷酸序列，各重組核苷酸序列編碼不同的抗原肽，其中所述至少兩個(gè)重組核苷酸序列插入到病毒基因組的不同的非編碼區(qū)中，所述非編碼區(qū)選自位于UL44與UL45之間的區(qū)、位于UL45與UL46之間的區(qū)、位于US10與SORF3之間的區(qū)、位于SORF3與US2之間的區(qū)。

發(fā)明領(lǐng)域

本發(fā)明通常涉及疫苗制劑領(lǐng)域。本發(fā)明具體涉及其中已經(jīng)插入至少兩個(gè)外源基因的多價(jià)重組皰疹病毒，以及它們用于同時(shí)誘導(dǎo)針對(duì)多種禽類疾病的保護(hù)性免疫的用途。

發(fā)明背景

家禽的肉和蛋是重要的食物來(lái)源，由于人口增長(zhǎng)及它們的高性價(jià)比，其消耗量始終在增加。近來(lái)的禽流感疫情令輿論聚焦于家禽健康以及食品安全與保障。家禽疫苗技術(shù)舉世矚目。

表達(dá)病原體蛋白的病毒載體通常用作針對(duì)目標(biāo)病原體的家禽疫苗。包括此類病毒載體的疫苗在受感染細(xì)胞中誘導(dǎo)外源病原體蛋白的表達(dá)，并由此誘發(fā)相應(yīng)的T細(xì)胞免疫。

眾所周知的是，所有皰疹病毒，包括火雞皰疹病毒(HVT)和馬立克氏病病毒(MDV)可以以潛在或持續(xù)性感染的狀態(tài)永久存活在受感染動(dòng)物體內(nèi)。因此，開發(fā)了其中已整合衍生自病原體的外源基因的重組皰疹病毒，用作提高免疫動(dòng)物的免疫力持續(xù)時(shí)間的病毒載體疫苗。

HVT的基因組結(jié)構(gòu)、其作為對(duì)抗MDV的疫苗的廣泛使用以及其在雞中持久保留的能力，使得該病毒成為制造重組家禽疫苗的有吸引力的載體。

使用混入編碼外源抗原的基因的重組皰疹病毒，已經(jīng)開發(fā)了疫苗制劑以實(shí)現(xiàn)有效的禽類接種疫苗。通過(guò)插入的外源DNA序列，此類疫苗制劑能夠針對(duì)MDV(載體)和另一種禽類疾病進(jìn)行接種。

盡管此類疫苗制劑能夠有效地針對(duì)多種致命疾病對(duì)禽類進(jìn)行接種，當(dāng)向鳥類注入兩種或多種各自攜帶不同的外源抗原基因的重組皰疹病毒時(shí)，會(huì)發(fā)生病原體之間的競(jìng)爭(zhēng)和免疫抑制。

因此，將著重研究同時(shí)針對(duì)不同疾病免疫的多價(jià)重組皰疹病毒(即攜帶至少兩種不同的抗原基因)。但是，迄今為止，表達(dá)多種外源基因的重組HVTs(rHVTs)已證明是不穩(wěn)定的，并且在培養(yǎng)細(xì)胞中反復(fù)傳代的過(guò)程中所有或部分該外源基因被刪除。因此，此類不穩(wěn)定的多價(jià)病毒載體不能用作有效的疫苗。

因此，需要穩(wěn)定的多價(jià)重組病毒載體，能夠在受感染的細(xì)胞中共同表達(dá)外源基因。

發(fā)明內(nèi)容

由申請(qǐng)人進(jìn)行的工作獲得了令人驚訝的發(fā)現(xiàn)——在皰疹病毒基因組中的一組特定插入位點(diǎn)可用于穩(wěn)定地插入和表達(dá)兩種或多種抗原基因，由此提供用于禽類接種的有效的多價(jià)病毒載體。更特別地，申請(qǐng)人已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，幾種插入位點(diǎn)可用于同時(shí)結(jié)合不同的抗原基因，提供穩(wěn)定的多價(jià)重組病毒載體。

因此，本發(fā)明涉及一種重組禽類皰疹病毒，其包含至少兩個(gè)重組核酸序列，各重組核苷酸序列在禽類細(xì)胞中編碼和表達(dá)抗原肽，其中所述至少兩個(gè)重組核苷酸序列插入到病毒基因組的不同非編碼區(qū)，該非編碼區(qū)選自位于UL44與UL45之間的區(qū)、位于UL45與UL46之間的區(qū)、位于US10與SORF3之間的區(qū)和位于SORF3與US2之間的區(qū)。

在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，在位于UL45與UL46之間的區(qū)中插入一個(gè)重組核苷酸序列，并在位于UL44與UL45之間的區(qū)、位于US10與SORF3之間的區(qū)或位于SORF3與US2之間的區(qū)中插入一個(gè)重組核苷酸序列。如本申請(qǐng)中所示，此類重組禽類皰疹病毒構(gòu)建體在受感染的禽類細(xì)胞中提供了兩種相應(yīng)抗原肽的特別穩(wěn)定與有效的表達(dá)。

特別地。有利的是，這兩個(gè)或多個(gè)重組核苷酸序列在雞胚胎成纖維(CEF)細(xì)胞中共同表達(dá)，即使在10次傳代或更多次傳代后，優(yōu)選甚至在15次傳代后。