[發明專利]凝集測定用膠乳粒子

有效

• 申請號: 201380028328.8
• 申請日: 2013-04-01
• 公開（公告）號: CN104335048B
• 公開（公告）日: 2017-05-17
• 發明（設計）人: 北原慎一郎;高橋由紀
• 申請（專利權）人: 積水醫療株式會社
• 主分類號: G01N33/545
• 分類號: G01N33/545;C08F212/08;C08F212/14;C08F220/28;G01N33/543
• 代理公司: 中科專利商標代理有限責任公司11021
• 代理人: 牛海軍

技術領域

本發明涉及幾乎不引發非特異性反應的用于高靈敏凝集測定的膠乳粒子以及利用該膠乳粒子的凝集測定用試劑。

背景技術

在臨床檢查領域中，已經廣泛地進行利用抗原-抗體反應的免疫測定以確定樣品中的微量物質。在這些中，在實驗室中已經廣泛地使用利用攜帶抗體的膠乳粒子(在下文中也被稱為敏化膠乳粒子)的膠乳免疫濁度測定，因為可以通過短時間的簡單操作實現膠乳免疫濁度測定。在膠乳免疫濁度測定中，通過由免疫復合物形成期間敏化膠乳粒子的凝集導致的吸光度變化的光學檢測確定樣品中抗原或抗體的量。這種吸光度變化基于由敏化膠乳粒子的凝集導致的粒徑的明顯變化。

如在專利文獻1中描述的，主要由聚苯乙烯組成的聚苯乙烯膠乳粒子已經用于膠乳免疫濁度測定，這是因為可與其靶標物質特異性反應的抗原或抗體的固定(敏化)容易、較低的成本、以及容易控制這些粒子的聚合反應。不考慮這種優勢，即抗原或抗體的物理吸附(敏化)，聚苯乙烯膠乳粒子還可以吸附樣品中的非靶標蛋白。這種非靶標蛋白的吸附可能會引起通常所說的非特異性反應，即并非由特異性抗原-抗體反應引起的敏化膠乳粒子的凝集反應。應該抑制非特異性反應。

根據專利文獻1，將用抗原或抗體敏化的膠乳粒子用牛血清白蛋白(BSA)封閉以抑制非特異性反應。不幸的是，這種封閉仍然是不足的，并且產生高背景值。因此，這種措施對于能夠實現高靈敏測量的試劑的制備來說具有嚴重的困難。

專利文獻2公開了用于診斷劑的載體粒子的制備。通過在水溶性自由基聚合引發劑的存在下在水中使苯乙烯、由式(CH₂＝CR₃-COO(CH₂CH₂O)_X(CH(CH₃)CH₂O)_y(CH₂CH₂O)_ZR₄，其中R₃表示H或CH₃；R₄表示H或CH₃；x、y、和z各自表示0或100以下的整數，并且滿足關系1≤x+y+z≤100)表示的化合物、和苯乙烯磺酸鹽共聚來制備所述粒子。專利文獻2公開了僅使用由在其中x、y、和z中的至少一個是20以上的式表示的化合物，并且未提出使用任何其他化合物。此外，在聚合物粒子的制備中使用高含量的由該式表示的化合物；因此，所得到的聚合物粒子幾乎不將抗原或抗體物理吸附至其表面上并且不能起用于診斷劑的載體粒子的作用。

專利文獻3公開了抑制非特異性吸附的膠乳粒子，其通過將具有不同鏈長度的聚乙二醇和抗體或抗原經由共價鍵共同固定至粒子表面上以防止脫附而制備。不幸的是，膠乳粒子應當具有大量的用于將抗體和聚乙二醇鏈結合至粒子表面上的官能團，并且應當通過涉及抗體的共價結合、隨后的聚乙二醇的共價結合的復雜方法制備。

相關技術

專利文獻1：日本專利號3708942

專利文獻2：日本已審查的專利申請公開號58-34486

專利文獻3：WO2010/082681

發明概述

為了解決常規膠乳免疫濁度測定中的問題而已經做出的本發明的目標是提供，幾乎不引發非特異性反應并且可以容易地制備診斷劑的用于高靈敏凝集測定的膠乳粒子，以及包含膠乳粒子的凝集測定用試劑。

專利文獻2說明了僅以重量計使用的單體，并且未提出或描述結合至膠乳粒子表面的乙二醇(含乙二醇的)單體的最佳量(密度)和丙二醇(含丙二醇的)單體的最佳量(密度)。由于這種原因，應該在對能夠充分抑制非特異性反應的合成條件的檢查中根據單體的分子量通過試錯法確定單體的最佳量。專利文獻3除了制備膠乳粒子的步驟之外還需要結合乙二醇(含乙二醇的)單體的步驟，結果是復雜的兩步操作，其包括膠乳粒子制備期間對用于結合乙二醇的官能團的控制以及官能團與乙二醇結合的控制。

解決問題的方案

為了解決問題已經進行了廣泛研究的本發明的發明人已經根據本發明通過簡單操作在膠乳粒子合成的同時制備了凝集測定用膠乳粒子。本發明的特征如下。

方面[1]。一種凝集測定用膠乳粒子，所述凝集測定用膠乳粒子包含：具有苯基的可聚合單體，具有苯基和磺酸鹽的可聚合單體，以及由式(1)表示的可聚合單體，其中粒子表面上的由式(1)表示的可聚合單體中的官能團的密度是0.05至0.5μmol/m²：