[發明專利]用于蛋白質純化的親和試劑

有效

• 申請號: 201380024731.3
• 申請日: 2013-03-15
• 公開（公告）號: CN104620104B
• 公開（公告）日: 2017-03-01
• 發明（設計）人: 帕特里克·布朗;愛德華·R·沃茨;佩爾·哈布雷
• 申請（專利權）人: 非凡食品有限公司;小利蘭斯坦福大學理事會
• 主分類號: G01N33/00
• 分類號: G01N33/00
• 代理公司: 北京律盟知識產權代理有限責任公司11287
• 代理人: 沈錦華

交叉引用

本申請要求2012年03月16日提交的美國臨時申請第61/611,999號的權益，所述申請以引用的方式并入本文中。

背景技術

具有潛在商業價值的蛋白質和其它分子以商業上適用的量存在于天然來源中，用作食品成分(例如核酮糖二磷酸羧化酶加氧酶、種子貯藏蛋白、豆血紅蛋白)、工業酶(例如木瓜蛋白酶、菠蘿蛋白酶等)、結構材料或藥物。蛋白質或其它分子的純度對于最優效用來說可能是重要的。

純植物、動物或微生物蛋白質的商業來源的稀有性突顯了本領域中對于從粗溶液高效并且經濟地純化蛋白質或其它分子的通用可縮放方法的現有需要。

發明內容

本文公開了用于分離一或多種靶蛋白的方法，其包含：(a)在結合pH下將包含所述一或多種靶蛋白的組合物施用到包含一或多種可轉換親和試劑的底物，以使得所述靶蛋白與所述可轉換親和試劑結合；和(b)在釋放pH下將溶液施用到包含所述一或多種可轉換親和試劑的所述底物，以使得所述一或多種靶蛋白從所述一或多種可轉換親和試劑釋放，因此分離所述一或多種靶蛋白。一些實施例進一步包含(c)在步驟(a)與步驟(b)之間，在所述結合pH下施用洗滌溶液，其中所述洗滌溶液移除一或多種污染物。在一個實施例中，所述一或多種可轉換親和試劑不包含抗體。在一個實施例中，所述一或多種靶蛋白是抗體。在一個實施例中，所述一或多種靶蛋白可以用以治療疾病或病癥。在一個實施例中，所述疾病或病癥是癌癥。

在一些實施例中，所述一或多種靶蛋白包含植物蛋白。在一個實施例中，所述一或多種靶蛋白選自由以下組成的群組：豆血紅蛋白、非共生血紅蛋白、血紅蛋白、肌紅蛋白、血綠蛋白、無脊椎動物血紅蛋白、神經球蛋白、細胞球蛋白、原球蛋白、截短2/2球蛋白、HbN、藍藻球蛋白、HbO、Glb3和細胞色素、地獄之門球蛋白I(Hell′s?gate?globin?I)、細菌血紅蛋白、纖毛肌紅蛋白、黃素血紅蛋白、核糖體蛋白、肌動蛋白、己糖激酶、乳酸脫氫酶、果糖二磷酸醛縮酶、磷酸果糖激酶、丙糖磷酸異構酶、磷酸甘油酸激酶、磷酸甘油酸變位酶、烯醇酶、丙酮酸激酶、蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶、糖蛋白、凝集素、粘蛋白、甘油醛-3-磷酸脫氫酶、丙酮酸脫羧酶、肌動蛋白、翻譯延長因子、組蛋白、核酮糖-1，5-二磷酸羧化酶加氧酶(核酮糖二磷酸羧化酶加氧酶)、核酮糖-1，5-二磷酸羧化酶加氧酶活化酶(核酮糖二磷酸羧化酶加氧酶活化酶)、白蛋白、大豆球蛋白、伴大豆球蛋白、球蛋白、豌豆球蛋白、伴白蛋白、麥膠蛋白、谷蛋白、麩質、麥谷蛋白、大麥醇溶蛋白、醇溶谷蛋白、菜豆蛋白(蛋白質)、蛋白質體、黑麥醇溶蛋白、伸展蛋白、小麥麩質、膠原蛋白、玉米蛋白、高梁醇溶蛋白、燕麥蛋白、脫水蛋白、親水素、胚胎發生晚期豐富蛋白、天然未折疊蛋白、任何種子貯藏蛋白、油質蛋白、油體鈣蛋白、油體固醇蛋白或其它油體蛋白、營養貯藏蛋白A、營養貯藏蛋白B、蒙恩(moong)種子貯藏8S球蛋白、豌豆球蛋白、豌豆白蛋白或其組合。

在一些實施例中，所述一或多種可轉換親和試劑包含小分子化合物。在一些實施例中，所述小分子化合物包含肽、類肽、3-肽或D-肽亞單位。在一些實施例中，所述結合pH在約7與約11之間。在一些實施例中，所述結合pH是約9。在一些實施例中，所述釋放pH在約3與約7之間。在一些實施例中，所述釋放pH是約6。在一些實施例中，所述一或多種靶蛋白用以生產消費品。在一些實施例中，所述消費品是肉類替代品。在一些實施例中，所述消費品是乳酪替代品。在一些實施例中，所述消費品是牛奶替代品。在一些實施例中，所述消費品是蛋類替代品。

在一些實施例中，本發明提供一種包含非多肽pH可轉換試劑的組合物，其在第一pH下結合標靶并且在第二pH下不結合所述標靶。

在一些實施例中，所述pH可轉換試劑是類肽。在一些實施例中，所述類肽包含N個亞單位。在一些實施例中，所述N個亞單位是1、2、3、4或5個亞單位。在一些實施例中，N個亞單位是2個亞單位。在一些實施例中，所述類肽在多個多樣性點被修飾。在一些實施例中，所述多個多樣性點是至少1、2、3、4、5、6個多樣性點。在一些實施例中，所述多個多樣性點是4個多樣性點。

在一些實施例中，所述類肽包含三嗪。在一些實施例中，所述三嗪是被三取代的。

在一些實施例中，其中所述pH可轉換試劑具有主鏈結構，其包含：