[發明專利]檢測結核的方法

有效

• 申請號: 201380017195.4
• 申請日: 2013-01-25
• 公開（公告）號: CN104272111B
• 公開（公告）日: 2017-10-03
• 發明（設計）人: F·納耶里
• 申請（專利權）人: 豌豆屬植物研究所股份公司
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569;C12Q1/04;C07K16/12
• 代理公司: 永新專利商標代理有限公司72002
• 代理人: 王健

技術領域

本發明涉及檢測個體內結核感染的方法和檢測個體是否已接種了抗結核疫苗的方法。

發明背景

結核(TB)是一種由結核分枝桿菌(Mtb)引起的傳染疾病^1,2。目前，它是全世界死于傳染疾病的其中一個主要原因，因此形成了一個重要公共衛生難題²。盡管TB病例的數量自2006年起在下降，但是800萬至1000萬感染者中每年估計報告300萬死亡病例^1,3。大約20億人潛伏感染Mtb，并且根據WHO，它在全世界每年引起980萬新的病例以及大約180萬死亡數^1,3。這個問題隨著耐多藥(MDR)和廣泛耐藥(XDR)菌株的出現而更加復雜^2,4。全世界用于診斷TB的最常用方法是痰涂片鏡檢⁵，但是在一些發達國家可以通過培養法或快速分子試驗診斷⁶。考慮到TB的全球流行速度正在增加以及現有疫苗－牛結核桿菌卡介苗－的有限保護，非常需要能夠阻止這個公共衛生問題的候選疫苗^7,8。因此，許多研究者正努力開發新的抗Mtb的改進疫苗^4,7。

結核分枝桿菌(Mtb)是由Robert Koch在1881年通過培養碎肉芽腫鑒定的。Mtb是一種耐酸、革蘭氏陽性并且生長緩慢的芽孢桿菌，直徑和長度分別為0.5μm和1-4μm，使它小于許多細菌⁹。它的蠟質細胞壁由長鏈脂肪酸組成，其中大多數是分枝菌酸和糖脂例如脂阿拉伯甘露糖(LAM)、酚醛樹脂和磷酸糖脂(phosphoglycoloipid)和硫脂。其他細胞壁組份包括肽聚糖和阿拉伯半乳糖¹⁰。細胞壁的特性增強結核分枝桿菌在巨噬細胞內的復制和存留，并且也對在吞噬體內預適應有作用^9,11。Mtb調節抗原遞呈和巨噬細胞的殺菌活性的能力使得它成為最成功的人類病原體¹¹。

Mtb是一種需氧病原體，生長于宿主的細胞內區域，因此在氧氣供應完全充足的肺組織生長地更好³。它通常感染肺部(肺TB)，但有時也感染其他位置(肺外TB)。該疾病僅僅當肺TB患者通過噴嚏、咳嗽或講話排出桿菌時在空氣中傳播⁶。從空氣中吸入它們后，傳染性結核桿菌通過呼吸道機動進入機體組織。被血液或淋巴液攜帶至肺尖和淋巴結后，它們接著在這些位置定居³。TB感染的特性和后果主要由宿主和病原體在感染發病時的相互作用決定⁷。在感染的2-6周內淋巴細胞和噬菌體被募集到感染位置，導致肉芽腫的產生，TB感染的標志。所述桿菌存在于肉芽腫內，在那里它們能夠在以后被重新激活或當它們的數量上升時被釋放至氣道³。

結核診斷；可用的方法

癥狀診斷

增加的死亡數量和TB不斷爆發使人們認識提高。如果他們持續咳嗽(超過2周)、發冷、盜汗、厭食、體重減輕、疲勞、胸痛和氣喘，他們尋求就診。肺外TB可能具有像背痛、抽搐、頸部腫塊、紅眼、排尿困難、腳腫、頭暈、不育、關節痛、吞咽困難、排便習慣改變和皮膚潰瘍的癥狀。

培養分析

傳統的培養分析方法被用于鑒定病原菌。痰、胃抽出物、來自肺部的液體通過具有清洗步驟的支氣管鏡檢噴射出來，胸膜活檢的來自肺部內膜的組織和胸液是用于TB病常見診斷的培養的最常用樣品。進行抗酸染色鑒定涂片陽性菌株。通過培養來自可疑者的樣品能夠獲得清晰可辨的Mtb克隆。培養試驗靈敏(80％)并具有98％特異性，計有2％錯誤判讀。

結核菌素試驗/PPD

結核菌素試驗或曼托試驗或純蛋白衍生物(PPD)或Priquette試驗是用于TB的常見診斷手段。

在PPD試驗中，衍生于結核分枝桿菌的蛋白質被消毒并從培養濃縮物中純化，在前臂皮下注射。細菌發生史將導致免疫反應，其可通過注射結核菌素(結核桿菌的甘油提取物)后48-72小時內注射位置的膨脹鑒定。測量注射位置的硬化(包埋的堅硬區域)(5mm,10mm或15mm)，如果有免疫反應表示陽性。

HIV陽性的人、器官移植、免疫抑制的患者、有結核分枝桿菌接觸史或TB發病史的人和居住在衛生差/不干凈區域的人更可能是陽性PPD結果。