[實用新型]小鼠S100鈣結合蛋白B酶聯免疫吸附測定試劑盒

有效

• 申請號: 201320598281.6
• 申請日: 2013-09-27
• 公開（公告）號: CN203479810U
• 公開（公告）日: 2014-03-12
• 發明（設計）人: 汪景;孫穎;彭夫望;楊娟;章秀波;高強;劉曉樂;李華淵;何峰容
• 申請（專利權）人: 武漢優爾生科技股份有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本實用新型屬于涉及生物技術領域，具體而言，涉及小鼠S100鈣結合蛋白B酶聯免疫吸附測定試劑盒。

背景技術

S100鈣結合蛋白B(S100B)由Moore等于1965年首先在牛腦組織中發現，S100B蛋白是S100蛋白的家族成員之一，屬于EF-hand超家族，是一種分子量較小的酸性鈣結合蛋白。主要由星形膠質細胞合成并分泌，但少突膠質細胞、小膠質細胞、神經元室管膜細胞、淋巴細胞、脈絡叢上皮細胞也會少量合成S100B。

S100B蛋白被認為是一種鈣傳感器蛋白，通過鈣離子信號轉導途徑在細胞增殖、分化、肌肉收縮、基因表達及細胞凋亡中發揮重要作用。S100B蛋白在腦、軟骨、骨骼肌細胞的生長及修復過程中可激活細胞增殖與遷移，抑制細胞凋亡和分化；在顱腦損傷及神經變性過程中可活化星形膠質細胞；在心肌梗死后可調節心肌細胞的重塑；調節細胞內Ca2+的內穩態；在黑色素瘤及膠質瘤的發病過程抑制P53的磷酸化。S100B蛋白作為中樞神經系統損傷的重要血清學標志物研究得較為廣泛。S100B蛋白作為星型膠質細胞活躍的標志物，對精神疾病患者尤其是精神分裂癥患者的病情評估具有指導性意義。S100B蛋白對其他系統疾病也有著重要的研究價值。S100B蛋白的檢測有助于多種疾病的診斷、病情進展評估、治療檢測及預后判斷，有著更為廣闊的應用前景。

S100B蛋白的檢測主要采用免疫學方法，常用方法有放射免疫分析法(RIA)，免疫放射測定法(IRMA)，高效液相色譜法(HPLC)，熒光免疫法(FIA)，免疫組織化學法(IHC)，聚合酶鏈式反應法(PCR)，酶聯免疫吸附試驗(ELISA)。

RIA和IRMA由于存在放射污染和危害,常用核素的半衰期短,試劑盒穩定期不長及不易快速、靈活的自動化分析等諸多不足而應用受限。Wiesmann等建立的熒光雙抗體夾心法靈敏度較高,可達到0.015μg/L,具有良好的可重復性,能實現自動化檢測,但儀器設備價格昂貴,因此不易于普及。而使用免疫組織染色檢測S100B雖然也可以測得μg/ml以上的含量，但由于現今免疫組織染色中還存在著一些問題，比如說組織固定問題，抗原修復問題以及陽性對照問題等，這些問題也嚴重制約了免疫組織染色方法的發展和普及；RT-PCR主要通過檢測mRNA來預測S100B的量，需要使用熒光定量PCR儀，一次性投資大，價格昂貴，不適合一般實驗室使用。

高效液相色譜法（HPLC）具有靈敏度高、準確性和重復性好等優勢，但需要昂貴的儀器設備，而且檢測過程繁瑣、樣本前處理的技術要求很高，難于操作。檢測人員需要具備專業的檢測技能和豐富的實驗經驗。

酶聯免疫吸附測定（ELISA）檢測技術是在RIA基本理論的基礎上發展起來的一種非放射性標記免疫分析技術。利用抗原-抗體之間特異性的免疫反應識別生物液體中的靶分子，并利用酶-底物的顯色反應定量的反應待測樣本中靶分子的含量。由于其特異性強、靈敏度、操作簡便及不需大型儀器等優點，現廣泛用于生物樣本的定量檢測實驗中。ELISA檢測試劑盒中的關鍵因素是獲得高特異性、高親和力的單克隆抗體。目前小鼠是科研實驗室最常用的實驗動物，但由于S100B來源于小鼠，所以常規的小鼠單克隆抗體的制備方法在這里是行不通的。而大鼠單抗的制備則可以解決這個問題，同時大鼠抗體具有一些小鼠抗體不具備的特點，大鼠抗體分子的輕鏈95%為κ型。因此可以利用小鼠抗大鼠抗體Igκ-1a抗體，高度特異性地結合雜交瘤產生的Igκ-1a的單克隆抗體，然后達到去除宿主大鼠產生的非特異性Igκ-1b抗體的目的，從而分離純化得到高純度的抗體。

因此，有必要選用一種快速、簡便能夠定量且靈敏度、準確度和特異性高的方法來進行小鼠S100鈣結合蛋白B的檢測。

實用新型內容

本實用新型目的制備是小鼠S100鈣結合蛋白B酶聯免疫吸附測定試劑盒，其具備操作簡便，成本低，穩定性好，可以滿足普通實驗室的要求的特點。為了實現本實用新型的目的，擬采用如下技術方案：

本實用新型一方面涉及一種小鼠S100鈣結合蛋白B酶聯免疫吸附測定試劑盒，包括酶標板，所述酶標板包括固相載體和包被層，其特征在于：所述固相載體上設置有多個微孔，所述包被層附著在所述固相載體的微孔表面，所述包被層是由小鼠S100鈣結合蛋白B抗體和牛血清白蛋白依次涂布在所述固相載體的微孔表面上形成的復合層。

在本實用新型的一個優選實施方式中，所述的多個微孔是指96個微孔。

在本實用新型的一個優選實施方式中，所述的固相載體是聚苯乙烯試劑板。