[實用新型]過濾器保持桶、過濾器保持桶組件及旋轉柱組件

有效

• 申請號: 201320499619.2
• 申請日: 2013-08-15
• 公開（公告）號: CN203803213U
• 公開（公告）日: 2014-09-03
• 發明（設計）人: 約蘭塔·維庫特;杰夫·庫爾林;丹尼爾·希姆希;格里塔·多容泰特
• 申請（專利權）人: 賽默飛世爾科技波羅的海有限公司
• 主分類號: B01D35/00
• 分類號: B01D35/00;C12M1/12
• 代理公司: 北京德琦知識產權代理有限公司 11018
• 代理人: 周艷玲;王琦

技術領域

本實用新型大致涉及過濾器保持桶、過濾器保持桶組件及旋轉柱組件，更具體地，涉及用于從酶促反應混合物和/或低濃度樣本中純化和濃縮DNA和/或RNA的旋轉柱。?

背景技術

在本領域中，從復雜的生物起始物質中分離核酸典型地在強變性和還原條件下進行。在分離過程中，包含核酸的起始物質使用蛋白質降解酶進行部分溶解。這將釋放隨后被提取至苯酚和/或三氯甲烷中的核酸。然后，核酸典型地可通過使用例如透析或乙醇沉淀的技術從水相中重新獲取。?

這種分離技術的問題在于費時、需要在設備上花費相當大的支出并且已經顯現的對健康的危害。?

已經開發了從不同的生物起始物質中分離核酸的可替代方法，例如瓊脂糖凝膠的使用。在此方法中，包含要被分離的核酸的瓊脂糖溶解在離液鹽溶液中，隨后將核酸結合在玻璃顆粒上。然后，從玻璃顆粒清洗并洗脫核酸。?

為了在不同的離液鹽存在的條件下基于將核酸結合至礦物載體（例如硅膠粉末或玻璃纖維粉末）的原則分離核酸的目的，已開發了許多試劑盒。使用這種試劑盒，可以采用小樣本量，其特別地與病毒核酸分離相關。?

為了為使用者提供更方便的方法，開發了一種“單管”方法，其中，與離液鹽結合的起始物質放置在包含一穩固插入的玻璃纖維過濾器或二氧化硅層的旋轉柱中，其允許核酸在單個步驟中與玻璃或二氧化硅結合。?

用于核酸純化的旋轉柱的使用基于一般的方法；首先從一定體積的溶解產物中分離核酸，然后通過將核酸結合在相對小體積的固相親和樹脂中而進行濃縮。例如，當使用傳統標準尺寸的小型柱時，大約800μl的初始溶液（包括約200μl溶解樣本，其余為結合緩沖劑）被裝載至約50-100μl的二氧化硅過濾器或任何其他合適的固態結合樹脂上。使用這種方法，結合樹脂的體積決定了洗脫緩沖劑的體積。由于較小體積的洗脫緩沖劑的使用對核酸產量有消極影響，因此洗脫緩沖劑的體積應當至少與結合樹脂本身的體積（在此特殊情況下約為100-200μl）相同。?

當在純化過程中有從相對大體積的初始生物物質中濃縮核酸的需要時，更小體積的固態結合相應當與大體積容量的柱結合使用，以容納更大體積的初始樣本和結合緩沖劑。?

問題在于，旋轉柱與一些要分離的樣本體積相比非常大。但是，由于旋轉柱的標準尺寸，不可能簡單地制作較小的容器，因為這些容器不能裝配至標準離心機中。?

對此問題的一個解決辦法包括使用塑料漏斗結構，其覆蓋過濾器的一部分，由此限制了過濾器的有效表面面積，并因此限制其對溶解樣本的暴露量。但是，液體能夠穿過過濾器的寬度從旁路散開，因此過濾器的有效體積沒有完全減小。?

目前，當需要減小洗脫體積并由此減小過濾器體積時，工業中當前使用兩種方法。在第一種技術中，裝配至小型旋轉柱中的直徑約為7mm的過濾器由漏斗形環覆蓋，其內徑明顯小于外徑，從而減小上述過濾器與樣本接觸的有效表面面積。這種方法的另一缺點在于一部分樣本材料可能擴散通過所有的過濾器，而從進一步的洗脫程序除去。在第二種技術中，玻璃纖維過濾器插入至旋轉柱的適配部分，而非插入至圓柱部分，適配部分用于將旋轉柱插入至真空歧管中。由于這種適配部分的直徑僅為約2mm，因此過濾器的有效表面面積減小了，但是由于與真空歧管的接觸，樣本被污染的風險增加了。?

實用新型內容

本實用新型，即具有期望固相過濾器參數的可插入式塑料桶的使用解決了上述問題，并且由于其允許使用不同體積的反應物和結合劑將核酸釋放至期望數量的固態親和樹脂上而從不同體積的起始物質中純化和濃縮核酸，因此可用于全部范圍的標準旋轉柱（小型、中型、大型）。使用這種可插入式塑料桶在下游應用的要求范圍內實現了期望的核酸濃縮，而不需要執行另外的濃縮步驟。?

通常，需要起始樣本的體積與溶解和/或結合溶液的體積成一定比例，以確保良好的細胞溶解并提高核酸產量。因此，通常不可能在將洗脫后滿足核酸濃度要求度的樣本裝載至柱之前減小溶解材料的體積。在這種情況下，可插入式桶用于方便地解決此問題。?

根據本實用新型的第一方面，提供一種過濾器保持桶，包括：?

中空主體、第一開口端和第二開口端；與所述第二開口端相比，所述第一開口端具有較小的直徑；所述中空主體包括從所述第二開口端朝向所述第一開口端延伸的錐形部和從所述第一開口端朝向所述第二開口端延伸的管形部，其中該管形部被構造用于對過濾器進行保持。?