[發明專利]一種處理石油類污染物的固定化菌藻共生系統及其應用

無效

• 申請號: 201310754942.4
• 申請日: 2013-12-31
• 公開（公告）號: CN103849615A
• 公開（公告）日: 2014-06-11
• 發明（設計）人: 徐珊;鄭斌;陸阿定;楊會成;周宇芳;胡建坤
• 申請（專利權）人: 浙江省海洋開發研究院
• 主分類號: C12N11/10
• 分類號: C12N11/10;C12N11/08;C02F3/34;C02F3/32;C12R1/89;C12R1/38;C12R1/07;C12R1/025;C02F101/32;C02F103/08
• 代理公司: 杭州杭誠專利事務所有限公司 33109
• 代理人: 尉偉敏

1.一種處理石油類污染物的固定化菌藻共生系統，其特征在于其是由如下方法制備而成：

（1）藻種的選擇及無菌化培養：小球藻藻液先經過溶菌酶和SDS無菌預處理，然后接種至含抗生素的BG11培養液中進行無菌化培養，得到無菌的小球藻藻液備用；?

（2）石油降解菌的選擇和培養：取6種石油降解菌，購買于中國海洋微生物菌種保藏管理中心（MCCC），其中假單胞菌屬3種，菌株編號為1A00241、1A00269?和1A00364，芽孢桿菌屬2種，菌株編號為1A0008、1A0009，無色桿菌屬1種，菌株編號為1A04524，對上述6種石油降解菌依次命名為Y1、Y2、Y3、Y4、Y5、Y6，并分別進行培養，培養時間為3~5天；

（3）復合載體菌藻凝膠球的制備：將步驟（1）得到的無菌的小球藻藻液和步驟（2）得到的石油降解菌采用海藻酸鈉和PVA作為固定化載體進行固定化，最后得到固定化菌藻共生系統。

2.根據權利要求1所述的固定化菌藻共生系統，其特征在于：步驟（1）所用無菌預處理方法為：取在BG11培養液中培養7d的小球藻藻液，離心去上清液，無菌蒸餾水重復洗滌離心3~5次，加1mL?0.005%的Tween80，5滴0.1mol/L的?EDTA，30mL無菌水，搖勻放置10min，再加1mL?0.5mg/ml溶菌酶，5滴0.25%?的SDS，搖勻，放置10min，離心去上清液后，再用無菌水洗滌3~5次。

3.根據權利要求1所述的固定化菌藻共生系統，其特征在于：步驟（1）中含抗生素的BG11培養液配方為：NaNO₃?1.5g/L、K₂HPO₄????3H₂O?0.04?g/L、MgSO₄???7H₂O?0.075?g/L、CaCl₂???7H₂O?0.036?g/L、檸檬酸0.006?g/L、檸檬酸鐵銨0.006?g/L、EDTA?0.001?g/L、Na₂CO₃?0.02?g/L、H₃BO₃?6.1×10-5?g/L、MnSO4???H₂O?1.69×10-4?g/L、ZnSO4???7H₂O?2.87×10-4?g/L、CuSO4???5H₂O?2.5×10-6?g/L、(NH₄)₆Mo₇O₂₄???4H2O?1.25×10-5?g/L、1ml/L青霉素和0.5ml/L卡拉霉素。

4.根據權利要求1所述的固定化菌藻共生系統，其特征在于：步驟（1）培養條件為：溫度25±1?℃，搖床轉速150r/min培養，光照強度為8000lux，光暗比L/D=14：10。

5.根據權利要求1所述的固定化菌藻共生系統，其特征在于：步驟（2）所用石油降解菌的培養基配方為：石油10?g、NH₄NO_3?3?g、KH₂PO_4?0.5?g、K₂HPO_4?0.5?g、微量元素液2?mL和水1000?mL，pH為7.5；微量元素液組分（重量）為：MgSO₄?0.4%、CuSO₄?0.1%、MnSO₄?0.1%、FeSO₄???H₂O?0.1%和CaCl₂?0.1%。

6.根據權利要求1所述的固定化菌藻共生系統，其特征在于：固定化方法具體為：用無菌注射器抽取含藻種、石油降解菌群和固定化復合載體的混合溶液至質量濃度4%、pH=6.7的硼酸溶液中，在10℃固定化交聯20h，然后將小球取出，去離子水脫鹽2h，并4℃保存于無菌海水中，得到固定化菌藻共生系統。

7.根據權利要求1所述的固定化菌藻共生系統，其特征在于：步驟（2）小球藻藻液、石油降解菌培養液與固定化載體的比例為1:1:2混合，固定化載體的配方（質量分數）為0.3%海藻酸鈉、20%PVA、8%SiO₂和0.6%CaCO₃。

8.一種權利要求1所述的固定化菌藻共生系統在石油污染物降解中的應用。