[發(fā)明專利]牛奶中氟喹諾酮類藥物的MALDI-TOF-MS檢測方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310746995.1
• 申請日: 2013-12-31
• 公開（公告）號: CN103743847A
• 公開（公告）日: 2014-04-23
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 張金玲;李凱;孫軍;田國寧;趙晗
• 申請（專利權(quán)）人: 張金玲
• 主分類號: G01N30/72
• 分類號: G01N30/72;G01N30/06
• 代理公司: 濟南舜源專利事務(wù)所有限公司 37205
• 代理人: 李江

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種牛奶中氟喹諾酮類藥物的檢測方法，具體地說，涉及一種牛奶中氟喹諾酮類藥物的MALDI-TOF-MS檢測方法，屬于食品安全檢測技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)

近年來，基質(zhì)輔助激光吸附電離飛行時間質(zhì)譜（MALDI-TOF-MS）技術(shù)廣泛應(yīng)用于多肽和蛋白質(zhì)分子量的測定及純度評價,如牛碳酸酐酶、蜂毒素、牛胰島素、牛胰島素B鏈、短桿菌肽S、肌紅蛋白、細胞色素C、胰蛋白酶原等，測定過程十分簡便，在國內(nèi)外的一些實驗室MALDI-TOF-MS已成為蛋白質(zhì)分子量測定的常規(guī)方法。在多肽、氨基酸質(zhì)譜分析方面，大多采用DHB、CHCA作為MALDI基質(zhì)。

目前，MALDI-TOF-MS多用于大分子物質(zhì)的分析，但是實際待測物的組成中經(jīng)常也包含有小分子物質(zhì)，基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時間質(zhì)譜(MALDI-TOF-MS)在分子量小于400u區(qū)域內(nèi)，由于基質(zhì)本身的電離，使小分子化合物質(zhì)譜圖中存在大量難以解釋的雜峰。大量雜峰的存在產(chǎn)生了很強的質(zhì)量歧視效應(yīng)，使那些不易電離的小分子化合物很難解吸電離出分子離子。

氟喹諾酮類藥物殘留通常采用酶聯(lián)免疫吸附法或液質(zhì)聯(lián)用法檢測，以上檢測方法的前處理過程是整個氟喹諾酮類藥物殘留檢測過程中最耗時耗力、最繁瑣的一個環(huán)節(jié)，同時又是對檢測結(jié)果影響最大的環(huán)節(jié)。目前，還沒有見到采用MALDI-TOF-MS來檢測氟喹諾酮類藥物殘留的研究報道。

發(fā)明內(nèi)容

???本發(fā)明要解決的問題是針對以上不足，提供一種牛奶中氟喹諾酮類藥物的MALDI-TOF-MS檢測方法，可以快速篩選牛奶中殘留的氟喹諾酮類藥物，采用本發(fā)明所述的檢測方法，前處理過程簡單，檢測效率高。

為解決以上問題，本發(fā)明采用的技術(shù)方案為：牛奶中氟喹諾酮類藥物的MALDI-TOF-MS檢測方法，其特征在于：所述檢測方法包括以下步驟：

8-羥基喹啉功能化介孔分子篩，得到SBA-15-8羥基喹啉；

制備MALDI-TOF-MS樣品：

將牛奶用三氟乙酸稀釋，得到樣品目標物；

將SBA-15-8羥基喹啉分散在乙醇溶液中并進行超聲處理，得懸浮液；

取懸浮液加入樣品目標物，室溫下自然干燥后得到MALDI基質(zhì)薄層；

取待測牛奶并置于MALDI基質(zhì)薄層上，溶劑自然蒸發(fā)后進行MALDI-TOF-MS分析。

一種優(yōu)化方案，所述制備MALDI-TOF-MS樣品步驟包括：

取10μL牛奶以體積比1：100用0.1%的三氟乙酸稀釋，得到樣品目標物；取1mg的SBA-15-8羥基喹啉分散在1mL乙醇溶液中并進行超聲處理，時間為3min，得懸浮液；

取1μL懸浮液加入樣品目標物，即用三氟乙酸稀釋后的牛奶上，室溫放置5-10min，自然干燥后得到MALDI基質(zhì)薄層；

量取0.5μL待測牛奶并置于MALDI基質(zhì)薄層上，放置5-10min，溶劑自然蒸發(fā)后，將基質(zhì)薄層通過MALDI-TOF-MS進行分析。

另一種優(yōu)化方案，所述8-羥基喹啉功能化介孔分子篩步驟包括：

將介孔分子篩SBA-15置于馬弗爐中烘烤干燥；

取干燥后的介孔分子篩SBA-15置于混有8羥基喹啉的甲苯溶液中，攪拌，然后將溫度在10分鐘內(nèi)升至120℃并保持，再進行過濾，清洗過濾后得到的固體，在真空下干燥，得到SBA-15-8羥基喹啉。

再一種優(yōu)化方案，MALDI-TOF-MS分析后得待測牛奶的質(zhì)譜圖，與純牛奶的質(zhì)譜圖進行對比，判斷待測牛奶中是否含有氟奎諾酮藥物。

本發(fā)明采用以上技術(shù)方案，與現(xiàn)有技術(shù)相比，具有以下優(yōu)點：將樣品和基質(zhì)混合點于靶板之上，直接進入基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時間質(zhì)譜進行測定，省去了繁瑣的前處理過程。當牛奶中氟喹諾酮類藥物殘留量超過0.05mg/kg時，可以有效地檢測到25種氟喹諾酮類藥物殘留中的18種。利用8-羥基喹啉功能化的介孔分子篩材料SBA-15為基質(zhì)，建立用MALDI-TOF-MS對牛奶中的25種氟喹諾酮類藥物進行快速篩選的方法，可大大提高檢測效率，以適應(yīng)進出口產(chǎn)品的快驗快放要求。

下面結(jié)合附圖和實施例對本發(fā)明作進一步說明。

附圖說明

附圖1為本發(fā)明實施例中以CHCA為基質(zhì)添加濃度為200mg/kg的麻保沙星的MALDI質(zhì)譜圖；

附圖2為本發(fā)明實施例中以DHB為基質(zhì)添加濃度為200mg/kg的麻保沙星的MALDI質(zhì)譜圖；