[發(fā)明專利]制備高分子量透明質(zhì)酸的方法及工程菌

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201310737032.5
• 申請(qǐng)日: 2013-12-20
• 公開（公告）號(hào): CN103993031A
• 公開（公告）日: 2014-08-20
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 劉浩;王震
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 天津科技大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N15/74
• 分類號(hào): C12N15/74;C12N1/21;C12P19/26;C12R1/46
• 代理公司: 天津盛理知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 12209
• 代理人: 趙瑤瑤

1.一種含有透明質(zhì)酸裂解酶基因的載體，其特征在于：所述的載體將hylb基因內(nèi)部1683bp基因片段插入初始載體pSET4s中，構(gòu)建了中間載體pSET4s::hylb，再將一段包含氯霉素抗性基因cmr長度為1056bp的基因片段插入到hylb基因片段中的DraIII位點(diǎn)，形成載體pSET4s::hylb::cmr。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的含有透明質(zhì)酸裂解酶基因的載體，其特征在于：所述hylb基因內(nèi)部1683bp基因片段始于hylb基因起始密碼子ATG下游202bp，結(jié)束于hylb基因終止密碼子TAG上游1310bp，基因序列見序列1。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的含有透明質(zhì)酸裂解酶基因的載體，其特征在于：所述一段包含氯霉素抗性基因cmr長度為1056bp的基因序列見序列2。

4.一種將權(quán)利1要求所述載體pSET4s::hylb::cmr轉(zhuǎn)入宿主菌,特異性敲除透明質(zhì)酸裂解酶基因hylb,獲得hylb基因功能缺失的工程菌。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的工程菌，其特征在于：所述工程菌的宿主菌為獸疫鏈球菌（Streptococcus?zooepidemicus）ATCC39920。

6.一種制備高分子量透明質(zhì)酸的方法，其特征在于：使用權(quán)利要求4或5所述的工程菌發(fā)酵獲得。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的制備高分子量透明質(zhì)酸的方法，其特征在于：所述發(fā)酵獲得透明質(zhì)酸的分子量為3.9×10⁶Da。

8.根據(jù)權(quán)利要求6所述的制備高分子量透明質(zhì)酸的方法，其特征在于：所述工程菌的發(fā)酵培養(yǎng)基：蔗糖50g/L，酵母提取物3.5g/L，酪蛋白胨10g/L，NaCl1.5g/L,K2HPO42g/L，MgSO4·7H2O0.4g/L。

9.根據(jù)權(quán)利要求6、7、8之一所述的制備高分子量透明質(zhì)酸的方法，其特征在于：所述工程菌的發(fā)酵條件：5L發(fā)酵罐，裝液量3L，接種量8%，37℃，pH7.0，通氣量3vvm，發(fā)酵20-30小時(shí)。