[發(fā)明專利]一種用來進(jìn)行植物蛋白發(fā)酵的納豆芽孢桿菌及其應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201310733956.8
• 申請(qǐng)日: 2013-12-27
• 公開（公告）號(hào): CN103710285A
• 公開（公告）日: 2014-04-09
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 劉栩州
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 吉林巨潤生物技術(shù)有限公司
• 主分類號(hào): C12N1/20
• 分類號(hào): C12N1/20;C12P21/00;C12R1/07
• 代理公司: 吉林長春新紀(jì)元專利代理有限責(zé)任公司 22100
• 代理人: 陳宏偉

技術(shù)領(lǐng)域：

本發(fā)明提供一種用來進(jìn)行植物蛋白發(fā)酵的納豆芽孢桿菌，本發(fā)明進(jìn)一步提供了該菌株在植物蛋白固體發(fā)酵中的應(yīng)用，屬于微生物發(fā)酵工程領(lǐng)域。

背景技術(shù)：

飼料蛋白作為第一大和第一重要原料是制約中國畜牧業(yè)發(fā)展的第一大權(quán)重因子，主控權(quán)受制于國外，因此飼料蛋白成為我國畜牧業(yè)發(fā)展的第一大原料供給瓶徑，和食物供給安全瓶徑，具有重要的國計(jì)民生和國民經(jīng)濟(jì)意義，更具有重要的國家安全意義。

豆粕經(jīng)過有益菌發(fā)酵處理后，可使豆粕中的各種抗原成分、抗?fàn)I養(yǎng)因子被有效的降低或去除，豆粕中的蛋白質(zhì)被分解成大豆肽，這種大豆肽中富含許多小肽，能直接被動(dòng)物吸收，而且大豆肽抗原性較低，幼畜、幼禽、蝦蟹使用后發(fā)生過敏反應(yīng)的概率大大降低，可明顯抑制消化道疾病的發(fā)生；提高動(dòng)物機(jī)體免疫力，促進(jìn)動(dòng)物生長；同時(shí)可大幅度減少疫苗、抗生素等藥物使用量；可作為斷奶仔豬、幼禽、蝦蟹，尤其是許多高檔經(jīng)濟(jì)動(dòng)物的優(yōu)良蛋白質(zhì)來源。這一產(chǎn)品的推廣應(yīng)用，將大大降低飼料工業(yè)對(duì)魚粉等動(dòng)物性飼料的依賴性，為我國節(jié)省大量用于進(jìn)口魚粉的外匯，推動(dòng)飼料工業(yè)的技術(shù)進(jìn)步，社會(huì)效益和生態(tài)效益明顯，同時(shí)可產(chǎn)生可觀的經(jīng)濟(jì)效益，發(fā)酵豆粕已成為豆粕開發(fā)生產(chǎn)的熱點(diǎn)。

但是豆粕在發(fā)酵時(shí)所采用菌種的性能會(huì)直接影響最終產(chǎn)品的品質(zhì)。可見，采用微生物發(fā)酵豆粕的關(guān)鍵在于菌種的選擇和發(fā)酵工藝的控制。

發(fā)明內(nèi)容：

本發(fā)明提供一種納豆芽孢桿菌，為一種新的菌株，可用來進(jìn)行植物蛋白發(fā)酵。

本發(fā)明公開了上述納豆芽孢桿菌在植物蛋白固體發(fā)酵中的用途，該菌株即可以脫除植物蛋白中的抗?fàn)I養(yǎng)因子，從而大幅度提高植物蛋白飼料的利用率，又可以作為益生菌進(jìn)入動(dòng)物體腸道內(nèi)，并長期存活，對(duì)動(dòng)物生長發(fā)育起到增強(qiáng)機(jī)體免疫力并促進(jìn)生長的作用。

本發(fā)明提供的一種用來進(jìn)行植物蛋白發(fā)酵的納豆芽孢桿菌，命名為納豆芽孢桿菌（Bacillus?natto），該疫苗株已于2012年8月21日保藏在《中國微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心》，保藏地址：北京市朝陽區(qū)北辰西路1號(hào)院3號(hào)，保藏號(hào)為：CGMCC6467。

本發(fā)明所述的所述納豆芽孢桿菌的篩選方法，包括以下步驟完成：

1）豬糞樣品采集

收集樣品，冷藏備用；

2）芽孢桿菌預(yù)篩選和增殖培養(yǎng)

將樣品進(jìn)行預(yù)加熱處理，并用普通營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)；

3）單個(gè)菌落的分離

利用重復(fù)劃線法獲得單菌落；

4）耐膽鹽篩選

用含有豬膽鹽的營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基進(jìn)行耐受性篩選，從而獲得耐膽鹽性較高的芽孢桿菌；

5）芽孢桿菌對(duì)致病性大腸桿菌的抑制

采用瓊脂擴(kuò)散法測量抑菌圈的直徑，從而獲得抑制大腸桿菌性能較高的納豆芽孢桿菌。

本發(fā)明納豆芽孢桿菌固體發(fā)酵的應(yīng)用：

單因素實(shí)驗(yàn)。根據(jù)微生物的特點(diǎn)，進(jìn)行單因素實(shí)驗(yàn)，主要影響因素為溫度、時(shí)間、和接種量。

正交實(shí)驗(yàn)：根據(jù)篩選出的最佳固液比，進(jìn)行正交實(shí)驗(yàn)，主要影響因素為溫度、時(shí)間、和接種量。單因素試驗(yàn)及正交試驗(yàn)主要測定指標(biāo)為抗原蛋白的含量，并計(jì)算抗原蛋白降解率。

經(jīng)過實(shí)驗(yàn)測定，芽孢桿菌發(fā)酵豆粕的最佳條件為溫度36℃，pH6.5，接種量10%，固液比1:0.8，發(fā)酵時(shí)間3d時(shí)，抗原蛋白降解率最高。

本發(fā)明具有以下有益效果：

本發(fā)明提供的納豆芽孢桿菌能抵抗動(dòng)物腸道內(nèi)的環(huán)境，包括胃中的酸性環(huán)境和十二指腸中的膽汁，順利的在動(dòng)物腸道內(nèi)存活并發(fā)揮抑菌效果。以益生納豆芽孢桿菌為發(fā)酵菌種，對(duì)大豆粕進(jìn)行發(fā)酵，采用固態(tài)發(fā)酵法進(jìn)行規(guī)模化生產(chǎn)，無論是在經(jīng)濟(jì)效益方面，還是在社會(huì)效益、生態(tài)效益方面，都大力推動(dòng)了我國畜牧業(yè)向持續(xù)、健康、穩(wěn)定的方向向前發(fā)展。

附圖說明：

圖1為本發(fā)明納豆芽孢桿菌對(duì)大腸桿菌的抑菌圈；

圖2~圖5為本發(fā)明固液比對(duì)芽孢桿菌固體發(fā)酵效果圖。

具體實(shí)施方式

通過以下實(shí)施例進(jìn)一步舉例描述本發(fā)明，并不以任何方式限制本發(fā)明，在不背離本發(fā)明的技術(shù)解決方案的前提下，對(duì)本發(fā)明所作的本領(lǐng)域普通技術(shù)人員容易實(shí)現(xiàn)的任何改動(dòng)或改變都將落入本發(fā)明的權(quán)利要求范圍之內(nèi)。

實(shí)施例1

納豆芽孢桿菌的獲得與鑒定

本發(fā)明采用了以下技術(shù)路線進(jìn)行篩選：

1、豬糞樣品采集