[發(fā)明專利]一種化風丹藥母中雙酯型生物堿的檢測方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310726287.1
• 申請日: 2013-12-25
• 公開（公告）號: CN103713058A
• 公開（公告）日: 2014-04-09
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 張永萍;徐劍;高莉;廖小剛;曹國瓊
• 申請（專利權(quán)）人: 遵義廖元和堂藥業(yè)有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02
• 代理公司: 北京聯(lián)創(chuàng)佳為專利事務所(普通合伙) 11362
• 代理人: 張梅

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種化風丹藥母中雙酯型生物堿的檢測方法，屬于藥品技術(shù)的領(lǐng)域。

背景技術(shù)

化風丹是由藥母、紫蘇葉、僵蠶、天麻等中藥材加工制成的丸劑，收載在《國家中成藥標準匯編內(nèi)科分冊》。臨床常用于治療風痰閉阻、中風偏癱、癲癇和面部神經(jīng)麻痹等癥。化風丹藥母由牛膽水、白附子、生半夏、生天南星、生川烏、郁金和神曲經(jīng)獨特傳統(tǒng)的發(fā)酵方法制作而成。由于化風丹藥母的原料中含有生川烏等烏頭類藥材，眾所周知，烏頭類藥材生品毒性比較大，臨床用量較小，故一般需要炮制后方能入藥。烏頭的炮制一般為：蒸法、煮法、高壓蒸制、微波炮制、酵母菌發(fā)酵法等。而本發(fā)明所述化風丹藥母是利用微生物和酶經(jīng)過一定時間的發(fā)酵制作而成。

現(xiàn)代化學和藥理研究證實了生物堿類成分是川烏的主要有效成分和毒性成分，其中雙酯型生物堿是其主要的毒性成分。川烏中雙酯型生物堿最具代表性的為：烏頭堿、新烏頭堿和次烏頭堿。因此，對于化風丹藥母中雙酯型生物堿含量的測定具有重要的意義，但《國家中成藥標準匯編內(nèi)科分冊》化風丹項下并沒有對藥母中雙酯型生物堿制定標準，導致藥母的質(zhì)量參差不齊，進而影響化風丹的臨床療效。為此，本發(fā)明提供了化風丹藥母中雙酯型生物堿的檢測方法，為更好地控制化風丹的質(zhì)量提供了參考。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題在于，提供一種化風丹藥母中雙酯型生物堿的檢測方法。所述檢測方法能夠同時測定化風丹藥母中烏頭堿、新烏頭堿和次烏頭堿三種生物堿的含量，本發(fā)明所述檢測方法便于操作，三種生物堿分離完全，峰形好，重復性好，結(jié)果可靠。

為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案實現(xiàn)：

一種化風丹藥母中雙酯型生物堿的檢測方法，所述化風丹藥母按照重量組分計算，由牛膽汁126.7份、白附子28.2份、生半夏28.2份、生天南星28.2份、生川烏28.2份、郁金14.1份、神曲0.14份按照下述方法制備而成：取方中白附子、生半夏、生南星、生川烏、郁金、神曲粉碎成細粉；加入牛膽汁混合均勻，置于容器中發(fā)酵20-100天，取出，干燥，即得。

所述檢測方法采用高效液相色譜法測定：

色譜條件：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑的色譜柱；流動相：以乙腈：四氫呋喃=25:15為A；以乙酸—乙酸銨溶液（先配制0.1mol·L^-1的乙酸銨溶液，再以每1000mL0.1mol·L^-1乙酸銨溶液中加入0.5mL冰醋酸的比例配制而成）為B，進行梯度洗脫，洗脫程序為：0～22min，20%～23%A、80%～77%B；22～40min，23%～25%A、77%～75%B；流速1.0mL·min^-1，柱溫30℃，檢測波長200～300nm；理論塔板數(shù)按次烏頭堿峰計算不低于1000～6000；

對照品溶液的制備：取烏頭堿、新烏頭堿、次烏頭堿對照品適量，精密稱定，加異丙醇：三氯甲烷=1:1的混合液制成每1mL含烏頭堿0.050～0.150mg，含新烏頭堿0.080～0.200mg，含次烏頭堿0.060～0.160mg的混合對照品溶液；

供試品溶液的制備：取化風丹藥母2～4g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，加入氨試液1.5mL，精密加入異丙醇：乙酸乙酯=1:1的混合溶液10～50mL，稱定重量，超聲處理20～40min，放冷，再稱定重量，異丙醇：乙酸乙酯=1:1的混合溶液補足減失重量，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液12.5mL，40～60℃水浴揮干，殘渣精密加入異丙醇：乙酸乙酯=1:1的混合溶液2mL溶解，濾過，取續(xù)濾液，即得；

測定方法：分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10L，注入高效液相色譜儀，分別測量烏頭堿、新烏頭堿和次烏頭堿峰的面積，計算，即得。

前述化風丹藥母中雙酯型生物堿的檢測方法中，色譜柱為十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑：Inertsil?ODS-SP4.6mm×250mm，5μm。

前述化風丹藥母中雙酯型生物堿的檢測方法中，檢測波長為235nm，理論塔板數(shù)按次烏頭堿峰計算不低于3000。

前述化風丹藥母中雙酯型生物堿的檢測方法中，所述對照品溶液這樣制備：取烏頭堿、新烏頭堿、次烏頭堿對照品適量，精密稱定，加異丙醇：三氯甲烷=1:1的混合液制成每1mL含烏頭堿0.129mg，含新烏頭堿0.161mg，含次烏頭堿0.140mg的混合對照品溶液。