[發明專利]氯胺B溶液在雞球蟲卵囊培養及保存中的應用

無效

• 申請號: 201310717171.1
• 申請日: 2013-12-23
• 公開（公告）號: CN103710265A
• 公開（公告）日: 2014-04-09
• 發明（設計）人: 戚南山;孫銘飛;廖申權;吳彩艷;呂敏娜;李娟;謝明權;溫列娜
• 申請（專利權）人: 廣東省農業科學院動物衛生研究所
• 主分類號: C12N1/10
• 分類號: C12N1/10;C12N1/04;C12R1/90
• 代理公司: 廣州嘉權專利商標事務所有限公司 44205
• 代理人: 鄭瑩

技術領域

本發明涉及氯胺B溶液在雞球蟲卵囊培養及保存中的應用。

背景技術

對球蟲疫苗卵囊的培養及保存將直接關系疫苗的成本及免疫的成敗。目前在實驗室中可以使用的卵囊培養液有0.1％甲醛、1％硫酸及2.5％重鉻酸鉀等，通常使用2.5％的重鉻酸鉀溶液，但是重鉻酸鉀是一種重金屬化合物，長期使用會殘留于動物機體和環境中，影響人類和動物健康。因而亟待研發一種對人體和動物無害的球蟲疫苗卵囊培養液和保存液。

發明內容

本申請發明人在研究中發現：雞球蟲卵囊可以在氯胺B溶液中進行培養并長期保存，氯胺B學名為苯磺酰胺氯鈉鹽，英文名稱為chloramine?B，為白色或微黃的晶體或粉末，易溶于水、穩定性好，是一種具有廣譜殺菌能力的消毒劑，廣泛用于醫療衛生、飲水、餐具、器皿、游泳池等的消毒。本發明將其作為雞球蟲卵囊培養液和保存液。

因而，本發明的目的在于提供氯胺B溶液在雞球蟲疫苗培養及保存中的應用。

所述氯胺B溶液可以為水溶液，濃度為0.6～10％，優選為1.2％，按質量百分比計。

本發明的有益效果是：

利用氯胺B溶液作為雞球蟲卵囊的培養液可以有效提高雞球蟲卵囊的孢子化率。且雞柔嫩、堆型、巨型和毒害艾美耳球蟲卵囊在氯胺B水溶液中保存至6個月活力仍不受影響，保存至8個月卵囊產出減少量不超過25％，仍表現出良好活性。因此，氯胺B溶液可以取代重鉻酸鉀作為雞球蟲卵囊的培養和保存液。

具體實施方式

下面結合實施例對本發明作進一步的說明，但并不局限于此。如無特殊說明，以下“％”均指質量百分比。

實施例

下面我們用實驗驗證氯胺B水溶液可以用作雞球蟲卵囊的培養液和保存液。

1.試驗材料

1.1試驗動物：嶺南黃雛雞，由廣東省農業科學院動物科學研究所提供，飼養于已消毒的專用動物房內；雞籠和所用器皿均嚴格消毒，自由采食和飲用純凈水；實驗前觀察雛雞有無臨床癥狀及連續2d檢查糞便有無球蟲卵囊，備用。

1.2?102型肉雞料由廣東省新南都飼料有限公司定制育雛料，不含任何抗球蟲藥物。

1.3柔嫩艾美耳球蟲GD株早熟系、堆型艾美耳球蟲GD株、巨型艾美耳球蟲GZ株、毒害艾美耳球蟲GD株早熟系廣東省農業科學院動物衛生研究所寄生生物研究室保存。

1.4氯胺B、重鉻酸鉀：購自百靈威科技有限公司。

2.試驗方法

2.1雞球蟲新鮮卵囊的制備

14日齡雛雞經口接種柔嫩艾美耳球蟲GD株早熟系、堆型艾美耳球蟲GD株、巨型艾美耳球蟲GZ株、毒害艾美耳球蟲GD株早熟系等混合卵囊5×10⁴個(其中堆型艾美耳球蟲GD株2×10⁴，其他三種1×10⁴)，收集攻蟲后7日所排糞便，按《雞球蟲病學》(索勛，李國清編，1998年)方法分離和純化新鮮的雞球蟲卵囊。

2.2雞球蟲卵囊在氯胺B水溶液中的孢子化

配制2.5％的重鉻酸鉀水溶液及5種濃度的氯胺B水溶液：0.6％、1.2％、2.4％、4.8％、10％；將新鮮收集的新鮮雞球蟲混合卵囊平均分成7組，每組2.0×10⁵個卵囊，分別用氯胺B水溶液、高純水和重鉻酸鉀重懸，置于28℃水浴搖床震蕩培養。分別于培養后15h，20h，25h，30h，40，60h，血球計數板法記錄孢子化卵囊的數量，計算孢子化率。

2.3無菌檢驗

孢子化結束后，每組取重懸液100μL，涂LB平板，置37℃溫箱內培養72h，觀察細菌生長情況。

2.4雞柔嫩、堆型、巨型和毒害艾美耳球蟲卵囊在氯胺B水溶液中保存時間的研究

2.4.1柔嫩艾美耳球蟲GD株早熟系卵囊保存期試驗

將E.tenella?GD株早熟系卵囊保存于氯胺B水溶液中，分別置于4℃冰箱0至12個月，如下表所示劑量經口感染7日齡雞，觀察感染后1周內試驗雞的死亡、臨床血便、盲腸卵囊計數、盲腸病變記分及相對增重情況，評價不同保存期的卵囊對7日齡雞致病力的影響。

表1E.tenella?GD株早熟系卵囊保存期試驗設計

2.4.2毒害艾美耳球蟲GD株早熟系卵囊保存期試驗