[發明專利]化合物Ochrephilone在制備抗結核病藥物中的應用

無效

• 申請號: 201310712030.0
• 申請日: 2013-12-20
• 公開（公告）號: CN103735542A
• 公開（公告）日: 2014-04-23
• 發明（設計）人: 陸勇軍;馬雙雙;佘志剛;李翰祥;牛長紅;何磊
• 申請（專利權）人: 中山大學
• 主分類號: A61K31/365
• 分類號: A61K31/365;A61P31/06
• 代理公司: 廣州粵高專利商標代理有限公司 44102
• 代理人: 陳衛

技術領域

本發明屬于生物學領域，具體涉及化合物Ochrephilone在制備抗結核病藥物中的應用。

背景技術

結核病是由結核分枝桿菌引起的慢性傳染病，根據世界衛生組織從204個國家收集到的最新數據，結核病仍是目前威脅人類的一個主要傳染病殺手。《2012年全球結核病控制報告》中指出，2011年全球新增結核病患者870萬人，全球死于結核病的人數為140萬人。在中國，受結核分枝桿菌感染人數甚至超過5.5億，如果不采取有效的控制措施，在未來10年內，我國可能有近5000萬的感染者發生結核病。目前臨床上用于治療結核病的有效藥物少，治療周期長，對人體毒性大，同時耐藥性的菌株頻頻出現，使得新型安全高效的抗結核藥物開發迫在眉睫。

結核分枝桿菌絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶G是一種類真核蛋白激酶，可溶性的細胞質蛋白，無跨膜結構域，750個氨基酸，分子量約為82KDa。它的結構包括氨基端的硫氧還蛋白結構域，中間激酶催化活性結構域和羧基端的四肽重復序列結構域。激酶催化結構域本身沒有催化活性，需要兩端的結構域的調控作用，氨基端的硫氧還蛋白結構域中的半胱氨酸可以調節PKnG的氧化還原狀態，體外實驗鑒定氨基端的Thr63是主要的磷酸化位點。

結核分枝桿菌絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶G是結核分枝桿菌在感染宿主細胞后，分泌到宿主細胞內的蛋白。結核分枝桿菌被宿主細胞吞噬后形成吞噬體，通過阻止吞噬體與溶酶體的的融合，從而不被溶酶體降解，此時的結核分枝桿菌代謝活動降到最低，生長繁殖幾乎停止，不易被抗菌藥物殺滅，當機體免疫力降低時，結核分枝桿菌又繼續生長繁殖，恢復致病力。結核分枝桿菌這種“持留”狀態的形成機制目前研究的不是很清楚，但已有實驗證實PKnG在阻止結核分枝桿菌到溶酶體的轉運過程中發揮著重要的作用，其中PKnG氨基端的73個氨基酸，硫氧還蛋白結構域以及Thr63在調節PKnG介導的結核分枝桿菌在宿主細胞內的存活是必需的。PKnG成為可能的抗結核病藥物的靶點之一，并以其抑制劑篩選抗結核病藥物，有助于新型、安全、高效特異的天然活性提取物藥物的研發，有利于結核病的控制甚至根除。

發明內容

本發明的目的是為了克服現有技術中缺乏有效抗結核病藥物的缺陷，提供一種化合物在制備抗結核病藥物中的應用。

本發明通過以下技術方案實現上述目的。

本發明通過研究發現，化合物Ochrephilone具有有效抑制結核分枝桿菌絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶G自我磷酸化的活性，因此，本發明提供化合物Ochrephilone在制備抗結核病藥物中的應用。

本發明同時還提供化合物Ochrephilone在制備結核分枝桿菌絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶G抑制劑藥物中的應用。

具體地，所述藥物為抑制結核分枝桿菌絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶G的自我磷酸化的藥物。

本發明所用的化合物Ochrephilone是從海洋微生物中分離得到的天然代謝活性產物，化合物Ochrephilone的具體分離方法可具體參考文獻（肖碧紅,?佘志剛,?雷曉凌,?等.?南海沿海海藻內生真菌?ZJ27?次級代謝產物研究[J].?中藥材,?2011,?34(4):?544-546.），其分子結構式如式（Ⅰ）所示。化合物Ochrephilone還可以通過其他方法制備得到，無論哪種方法得到的化合物Ochrephilone的結構式都是一樣的，所以其功能都是一樣的。所以化合物的來源對本發明不做任何形式的限定。

。

本發明同時提供了一種抗結核病藥物，所述藥物含有Ochrephilone或其藥學上可接受的鹽或衍生物。該藥物還可以與已知的抗結核藥物同時使用。該藥物也可含有藥學上可接受的載體和/或賦形劑。

本發明首次發現，Ochrephilone可以以結核分枝桿菌絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶G作為靶點，抑制該蛋白的自我磷酸化作用。

所述的結核分枝桿菌絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶G基因的多核苷酸，具有SEQ?ID?NO:1所示的序列，其在基因文庫中登錄號為：NC_000962.3。

本發明所述的結核分枝桿菌絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶G是使用重組技術從原核宿主中產生。其具體制備方法包括如下步驟：

（1）利用PCR擴增法、重組法或者人工合成方法獲得編碼SEQ?ID?NO:1所述結核分枝桿菌絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶G的多核苷酸；

（2）將多核苷酸片段克隆并轉導或者轉化進合適的宿主細胞；

（3）在合適的培養基中培養宿主細胞；

（4）從培養基或細胞中分離、純化蛋白質。