[發明專利]野生葫蘆巴堿的新型提取方法

有效

• 申請號: 201310706466.9
• 申請日: 2013-12-10
• 公開（公告）號: CN103755630A
• 公開（公告）日: 2014-04-30
• 發明（設計）人: 萬莉;張亞紅;姚德坤
• 申請（專利權）人: 大興安嶺嘉迪歐營養原料有限公司
• 主分類號: C07D213/803
• 分類號: C07D213/803
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域：

本發明屬于天然藥物提取領域，涉及一種葫蘆巴堿的純化方法，特別是涉及一種利用超高壓技術和大孔樹脂吸附及柱層析耦聯技術富集純化葫蘆巴中葫蘆巴堿的方法。

背景技術：

胡蘆巴，又名：蕓香草《盛京通志》，香草、苦草、苦朵菜、香苜蓿。一年生草本，高40～50厘米。莖叢生，幾光滑或被稀疏柔毛。3出復葉，小葉卵狀長卵圓形或寬披針形，長1.2～3厘米，寬1～1.5厘米，近先端有鋸齒，兩面均有稀疏柔毛，小葉柄長1～2毫米，總柄長6～12毫米；托葉與葉柄連合，狹卵形，先端急尖。花無梗，1～2朵腋生：萼筒狀，萼齒5，披針形，比花冠短一半，外被長柔毛；花冠蝶形，初為白色，后漸變淡黃色，基部微帶紫暈，旗瓣長圓形，先端具缺刻，基部尖楔形，龍骨瓣偏匙形，長僅旗瓣的1／3，翼瓣耳形，雄蕊10，2體；子房無柄，柱頭頂生。莢果細長圓筒狀，長6～11厘米，寬0.5厘米左右，被柔毛，并具網脈，先端有長尖。種子棕色，長約4毫米。花期4～6月。果期7～8月。我國黑龍江、吉林、遼寧、河北、河南、安徽、浙江、湖北、四川、貴州、云南、陜西、甘肅以及新疆等地有栽培。種子含龍膽寧堿、番木瓜堿、膽堿、胡蘆巴堿等生物堿，皂甙元主要是薯蕷皂甙元、雅姆皂甙元和少量芰脫皂甙元、痕量替告皂甙元。尚分離出牡荊素、牡荊素-7-葡萄糖甙、葒草素或異葒草素的阿拉伯糖甙、黃酮的葡萄糖鼠李糖二糖甙，槲皮素、木犀草素等黃酮類。種子的一般組成為：水分10.30％、灰分3.15％、脂肪7.61％、總蛋白16.97％、總糖3.68％、纖維素6.4％、半纖維素11.98％。脂肪油中固體脂肪酸92.9％、揮發性脂肪酸1.5％、不皂化成分0.9％；卵磷脂6.25％、植物甾醇0.5露。脂肪酸中主要是亞油酸和棕櫚酸，并有少量油酸及亞麻酸。蛋白質中核蛋白55％。總糖中主要是半乳糖配甘露聚糖，還含維生素B1-320微克％

葫蘆巴堿具有溫腎，祛寒，止痛等功效，已引起國際社會的普遍關注。近年來，人們發現天然植物葫蘆巴中含有大量的葫蘆巴堿，從中提取葫蘆巴堿并且取得了可喜進展，原料葫蘆巴來源較廣。

發明內容：本發明的目的在于克服常規技術提取率相對較低、提取純度低等缺點，提供一種利用超高壓技術和大孔樹脂吸附及柱層析耦聯技術富集純化葫蘆巴中葫蘆巴堿的方法。

為實現上述目的，本發明采用的技術方案是：

一種利用超高壓技術和大孔樹脂吸附及柱層析耦聯技術富集純化葫蘆巴中葫蘆巴堿的方法，其步驟如下：

(1)將干葫蘆巴粉碎，加入乙酸乙酯，浸泡1小時后放入耐壓袋中，在20℃條件下處理，超高壓壓力在400—500MPA之間，時間在3—5min，回收乙酸乙酯，在60℃～70℃真空干燥得葫蘆巴堿粗提物；

(2)將所得葫蘆巴堿粗提物用大孔吸附樹脂進行吸附，吸附為靜態吸附或動態吸附；

(3)用50％～90％不同濃度的乙醇對大孔吸附樹脂進行洗脫，用薄層色譜法跟蹤檢測，收集葫蘆巴堿各階段洗脫液；

(4)將葫蘆巴堿各階段洗脫液濃縮，回收乙醇，得葫蘆巴堿半成品，其含量在40％以上；

(5)將所得葫蘆巴堿半成品粉末溶于石油醚中，加適量硅膠攪拌，烘干過60—80目篩，干法上樣，上工業級柱200—300目硅膠柱層析；

(6)以丙酮、石油醚在1～7∶1條件下進行梯度洗脫，薄層色譜法跟蹤檢測，收集葫蘆巴堿各階段洗脫液，減壓濃縮，回收溶劑；

(7)所得濃縮液在60℃～80℃下進行真空干燥；

(8)將干燥后的產品用75％-90％無水乙醇溶解，濃縮到原體積的十分之一，放置過夜得晶體；分離晶體將剩余物用50％-60％乙醇溶解，再次濃縮，重結晶，如此反復兩次，得到精制的葫蘆巴堿，其含量在90％以上。

所述的步驟(1)中，干葫蘆巴粉碎后過80～100目篩。

所述的步驟(2)中，所用的大孔吸附樹脂為NKA-9、D3520、D4006、H103、D4020、AB-8H和NKA-II型樹脂中的一種，吸附為靜態吸附或動態吸附。

本發明應用超高壓技術和大孔吸附技術分離純化葫蘆巴堿，對葫蘆巴堿的提取速度快，節省時間，提取率高，利用大孔樹脂分離純化分離效果明顯，提取純度高，可以得到含量40％以上的葫蘆巴堿半成品和含量90％以上的葫蘆巴堿終產品，克服了常規提取率相對較低、提取純度低的缺點。