[發明專利]樹葡萄組培苗快速繁殖的海綿液體培養基及其應用

有效

• 申請號: 201310696935.3
• 申請日: 2013-12-18
• 公開（公告）號: CN103733992A
• 公開（公告）日: 2014-04-23
• 發明（設計）人: 陳財寶
• 申請（專利權）人: 柳州市天姿園藝有限公司
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 北京中恒高博知識產權代理有限公司 11249
• 代理人: 牟彩萍

技術領域

本發明涉及植物組培苗快繁領域，具體涉及樹葡萄組培苗快速繁殖的海綿液體培養基及其應用。

背景技術

目前，樹葡萄的組培多采用簡單液體培養基+固體培養基的操作模式，但此種培養方式效率較低，增殖率低，且樹葡萄組培苗植株的品質不高，其中所用培養基成本較高。

發明內容

本發明的目的就是針對上述現有技術中的缺陷，提供了一種可提高樹葡萄組培增殖率海綿液體培養基。

為了實現上述目的，本發明提供的技術方案為：樹葡萄組培苗快速繁殖的海綿液體培養基，是選擇圓柱形的耐高溫過濾海綿，直徑與透氣蓋螺紋瓶底部大小一致，海綿厚度為1cm，在海綿上面均勻開有15個口徑為0.8cm，深度為0.5cm大小的V形孔，將海綿塊平放在培養瓶底部，開孔的一面朝上，直接用自來水配制藥品并經定容調好PH值即成液體培養基，適量分裝到放有海綿的培養瓶中，使營養液剛剛侵泡完海綿塊即可；所述液體培養基為1/2MS培養基。

本發明的第二個目的是提供了上述海綿液體培養基在樹葡萄組培苗快速繁殖中的應用。

進一步的，上述的應用，包括以下步驟：

1）將上述的的分裝好的海綿液體培養基經高壓滅菌，滅菌溫度為121-123℃，滅菌壓力為0.11-0.13MP，滅菌時間為22-25分鐘，得到滅菌后培養基；

2）培養材料的接種：無菌狀態下，將樹葡萄培養材料分切成單芽分別插種到滅菌后的海綿液體培養基的V形孔中，進行快速增殖培養，培養時間為30-35天，增殖率為5-6倍；

3）增殖材料的轉接：將步驟2）中增殖后的材料挾出分切再接種到新鮮的液體培養基中繼續進行增殖培養；此后當培養到30-35天時，再次將材料進行分切更換到新鮮的液體培養基中進行增殖培養；

4）生根培養：將步驟3）得到的增殖培養后的樹葡萄增殖材料轉接到一定數量后，將其分切成單株轉接到添加有瓊脂粉的固體培養基中進行生根培養，經過2～3個月培養煉苗后即得到樹葡萄組培苗移植株。

本發明的有益效果為：本發明提供的海綿液體培養基，具有以下優點：

1、樹葡萄組培材料能充分吸收到營養成份，提高品質及產量，增殖率可達5-6倍；

2、海綿可重復利用，且液體培養基分裝配制比較方便，瓶子等用具容易清洗干凈；

3、省去購買瓊脂粉的費用，降低生產成本。

具體實施方式

實施例1：

（一）海綿液體培養基的制作：

選擇圓柱形的耐高溫過濾海綿，直徑與透氣蓋螺紋瓶底部大小一致，海綿厚度為1cm即可，在海綿上面均勻開有15個口徑為0.8cm，深度為0.5cm大小的V形孔，將海綿塊平放在培養瓶底部，開孔的一面朝上。因不加瓊脂粉，可直接用自來水配制藥品并經定容調好PH值即成液體培養基，最后適量分裝到放有海綿的培養瓶中，使營養液剛剛侵泡完海綿塊即可；

（二）培養基的滅菌：

由于選用的海綿為耐高溫材料，主要成分為聚氨酯，具有抗腐蝕、無毒副作用、耐高溫（可達200℃）、強度高（回彈性好）、吸水性極強，可回收利用等優點，經過多次高壓滅菌后不變型仍可重復使用；分裝好的培養基經高壓滅菌（滅菌溫度為121-123度，壓力為0.11-0.13MP，時間為22-25分鐘），最后將滅菌好的液體培養基放到培養基儲藏室備用；

（三）培養材料的接種：

在無菌工作臺上將培養材料分切成單芽分別插種到海綿液體培養基的V形孔中，由于海綿有很好的回彈性和吸水性，對插在V形孔中的培養材料有一定的固定作用和保濕功能，利于培養物的生長和養分的吸收；

（四）培養材料的增殖培養：

培養在海綿液體培養基上的材料，由于液體培養基中分子或離子運動較快，其基部能夠充分接觸到營養液并能較好的吸收養分，同時也將自身切口分泌出來的醌類有害物質稀釋到液體培養基中，減少褐化的產生，從而達到快速增殖的效果，一般培養30-35天后增殖率可達到5-6倍；

(五)?增殖材料的轉接：

當增殖材料在液體培養基中培養30-35天后，培養材料不斷地增殖生長，已經吸收了大部分的營養成份和水分，同時液體培養基中也積累了一定的醌類等有害成分；此時應將增殖后的材料挾出分切再接種到新鮮的液體培養基中繼續進行增殖培養，此后當培養到30-35天時，不斷地將材料進行分切更換到新鮮的液體培養基中進行增殖培養，即可使生產達到一定數量和規模的材料；

（六）生根培養：