[發(fā)明專(zhuān)利]一種非病毒轉(zhuǎn)基因載體、制備方法及其應(yīng)用

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201310676481.3
• 申請(qǐng)日: 2013-12-11
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN103710383A
• 公開(kāi)（公告）日: 2014-04-09
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 趙曉麗;呂維加
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 深圳先進(jìn)技術(shù)研究院
• 主分類(lèi)號(hào): C12N15/85
• 分類(lèi)號(hào): C12N15/85;C12N15/87;C08B37/08;A61K48/00
• 代理公司: 廣州三環(huán)專(zhuān)利代理有限公司 44202
• 代理人: 郝傳鑫;熊永強(qiáng)

1.一種非病毒轉(zhuǎn)基因載體，其特征在于，所述非病毒轉(zhuǎn)基因載體為精氨酸短肽改性的殼聚糖，所述精氨酸短肽的一端通過(guò)酰胺鍵與所述殼聚糖相連。

2.如權(quán)利要求1所述的非病毒轉(zhuǎn)基因載體，其特征在于，所述精氨酸短肽為2～19個(gè)精氨酸脫水縮合得到。

3.如權(quán)利要求1所述的非病毒轉(zhuǎn)基因載體，其特征在于，所述殼聚糖的分子量為5kDa～100kDa。

4.一種非病毒轉(zhuǎn)基因載體的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

（1）提供精氨酸短肽；將所述精氨酸短肽和活化劑溶解于緩沖液中得到精氨酸短肽溶液；

（2）將殼聚糖溶解后得到殼聚糖溶液，將所述殼聚糖溶液滴加到所述精氨酸短肽溶液中，得到混合溶液，攪拌反應(yīng)1～6天，所述混合溶液中的氨酸短肽和殼聚糖發(fā)生酰胺化反應(yīng)，得到產(chǎn)物，將所述產(chǎn)物分離純化后進(jìn)行冷凍干燥，得到所述非病毒轉(zhuǎn)基因載體；所述非病毒轉(zhuǎn)基因載體為精氨酸短肽改性的殼聚糖，所述精氨酸短肽的一端通過(guò)酰胺鍵與所述殼聚糖相連。

5.如權(quán)利要求4所述的非病毒轉(zhuǎn)基因載體的制備方法，其特征在于，步驟（1）中所述精氨酸短肽為2～19個(gè)精氨酸脫水縮合得到。

6.如權(quán)利要求4所述的非病毒轉(zhuǎn)基因載體的制備方法，其特征在于，步驟（1）中所述活化劑為1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽、二環(huán)己基碳二亞胺、N-羥基丁二酰亞胺和N-羥基硫代琥珀酰亞胺鈉鹽中的至少一種。

7.如權(quán)利要求4所述的非病毒轉(zhuǎn)基因載體的制備方法，其特征在于，步驟（2）中所述殼聚糖的分子量為5kDa～100kDa。

8.如權(quán)利要求4所述的非病毒轉(zhuǎn)基因載體的制備方法，其特征在于，步驟（2）中所述精氨酸短肽和所述殼聚糖的摩爾比為1:1～1:20。

9.一種用于基因治療的納米復(fù)合物，其特征在于，所述納米復(fù)合物為質(zhì)粒DNA和權(quán)利要求1所述非病毒轉(zhuǎn)基因載體通過(guò)靜電作用形成的納米微球。

10.一種用于基因治療的納米復(fù)合物的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

將質(zhì)粒DNA和權(quán)利要求1所述的非病毒轉(zhuǎn)基因載體溶解于滅菌純水后，得到混合液，然后室溫靜置，所述混合液中的非病毒轉(zhuǎn)基因載體和質(zhì)粒DNA通過(guò)靜電作用形成納米微球，得到所述納米復(fù)合物。