[發明專利]克隆蘋果BKI1基因和蘋果BKI1基因編碼區序列的方法

無效

• 申請號: 201310672331.5
• 申請日: 2013-12-07
• 公開（公告）號: CN103642822A
• 公開（公告）日: 2014-03-19
• 發明（設計）人: 馬躍;張志宏;閻忠業;呂天星;劉志;王冬梅;張景娥;王豐;張蕾;代紅艷;李賀;劉月學
• 申請（專利權）人: 沈陽農業大學;遼寧省果樹科學研究所
• 主分類號: C12N15/29
• 分類號: C12N15/29;C07K14/415;C12N15/10
• 代理公司: 沈陽杰克知識產權代理有限公司 21207
• 代理人: 金春華

1.蘋果BKI1基因，其特征在于：其基因序列如SEQ?ID?NO:1所示。

2.根據權利要求1所述的蘋果BKI1基因，其特征在于，所述蘋果BKI1基因的編碼區序列如SEQ?ID?NO:2所示。

3.根據權利要求2所述的蘋果BKI1基因，其特征在于，所述蘋果BKI1基因編碼區序列的氨基酸序列如SEQ?ID?NO:3所示。

4.根據權利要求1、2或3所述的蘋果BKI1基因，其特征在于：所述的蘋果為“寒富”蘋果。

5.權利要求1所述的蘋果BKI1基因的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：

1）提取蘋果葉片中的總DNA；

2）提取蘋果葉片中的總RNA，然后將總RNA反轉錄成cDNA；

3）分別以DNA和cDNA為模板，通過設計的特定引物，利用PCR方法擴增，得到PCR產物；

其中，所述的特定引物是：

上游引物P1:5’-ATGGAGTCGTCGAGGACGAG-3’；

下游引物P2:5’-TCAAATCTCATGACTGACCA-3’；

4）PCR產物經回收、純化，克隆，測序分別得到DNA序列如SEQ?ID?NO:1所示的蘋果BKI1基因序列及cDNA序列如SEQ?ID?NO:2所示的蘋果BKI1基因編碼區序列。

6.根據權利要求5所述的制備方法，其特征在于步驟3）中，PCR反應體系為：20μL體系：

PCR反應程序為：94℃?3min；94℃?30s，58℃?1min，72℃?1min，35個循環；72℃延伸10min。

7.根據權利要求5或6所述的制備方法，其特征在于：所述的蘋果為“寒富”蘋果。