[發明專利]一種含綠色熒光蛋白報告基因的植物表達載體及其構建方法和應用

無效

• 申請號: 201310669160.0
• 申請日: 2013-12-07
• 公開（公告）號: CN103627724A
• 公開（公告）日: 2014-03-12
• 發明（設計）人: 張志宏;韓國粉;田義;代紅艷;馬躍;從佩華;李賀;劉月學;李曉明
• 申請（專利權）人: 沈陽農業大學
• 主分類號: C12N15/82
• 分類號: C12N15/82;C12N15/65;C12N15/66
• 代理公司: 沈陽杰克知識產權代理有限公司 21207
• 代理人: 金春華

1.一種含綠色熒光蛋白報告基因的植物表達載體，其特征在于：所述的植物表達載體是以pRI-AN-101載體為骨架載體，將GFP基因插入pRI-AN-101載體，得到重組載體pRI-AN-101-GFP，然后對GFP基因的NdeⅠ識別位點進行定點突變，得到含GFP基因的植物表達載體，命名為pRI101-GFP。

2.一種權利要求1所述的含綠色熒光蛋白報告基因的植物表達載體的構建方法，其特征在于包括以下步驟：

（1）GFP基因的獲得；

（2）將GFP基因插入質粒pGM-T中，得重組質粒pGM-GFP；

（3）用EcoR?I和SacI分別對pGM-GFP和pRI-AN-101載體進行雙酶切，將二者連接得到重組載體pRI-AN-101-GFP；

（4）以重組載體pRI-AN-101-GFP為模板，以SEQ?ID?NO：4所示的NdeⅠ識別位定點突變第一條引物和SEQ?ID?NO：5所示的NdeⅠ識別位定點突變第二條引物作為引物，進行PCR擴增，得到突變載體pRI101-GFP。

3.如權利要求2所述的構建方法，其特征在于：步驟（1）GFP基因的獲得方法如下：以pCXGFP-P載體質粒為模板，以SEQ?ID?NO：1所示的上游引物和SEQ?ID?NO：2所示的下游引物進行PCR擴增，得到GFP基因全長序列。

4.權利要求1所述的含綠色熒光蛋白報告基因的植物表達載體在雙子葉植物遺傳轉化中的應用。

5.含山楂NAC?domain基因的pRI101-GFP植物表達載體的構建，其特征在于包括以下步驟：

（1）山楂NAC?domain基因的獲得；

（2）將山楂NAC?domain基因插入質粒pGM-T中，得重組質粒pGM-NAC?domain；

（3）用Nde?I和Kpn?I分別對重組質粒pGM-NAC?domain和權利要求1所述的pRI101-GFP載體進行雙酶切，將二者連接，得到含山楂NAC?domain基因序列全長的植物表達載體pRI101-GFP-NAC?domain。