[發明專利]與轉基因植物外源Bt蛋白相互作用的人類蛋白ANKHD1

有效

• 申請號: 201310654463.5
• 申請日: 2013-12-05
• 公開（公告）號: CN103675296A
• 公開（公告）日: 2014-03-26
• 發明（設計）人: 王戎疆;許崇任;韓娟
• 申請（專利權）人: 北京大學
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司 11002
• 代理人: 王文君

技術領域

本發明涉及轉基因生物食品安全和基因工程領域，具體地說，涉及一種與轉基因植物外源Bt蛋白相互作用的人類蛋白ANKHD1。

背景技術

按照聯合國糧農組織（FAO）的定義，生物安全是指“避免由于對具有感染能力的有機體或者遺傳修飾有機體的研究和商品化生產而對人類的健康和安全以及環境的保護帶來的風險”，可歸納為生態風險、食品安全和非預期效應三個方面。轉基因生物中由于外源蛋白的引入在受體生物中表達而引起的生物安全問題引起了科學和民眾的普遍關注。在轉基因生物安全性評價的諸多項目中，食品的安全性問題是目前全球公眾爭論的熱點之一，其原因在于轉基因生物食用安全性評價具有顯著的難以預測性和特異性。轉基因食品可能產生的安全性問題主要包括：1）轉基因食品中的外源基因及其表達產物對人體產生毒性；2）導入受體中的外源基因序列或其表達的蛋白質的氨基酸序列與已知的致敏原具有同源性、甚至產生出新的致敏原，使轉基因食品具有過敏性；3）由于目前在遺傳操作過程中選用的載體大多數具有抗生素抗性標記，因此抗生素抗性基因可能被轉移到人和動物體內外的微生物中，從而產生耐藥性的微生物；4）轉基因食品的營養質量下降。由于外源基因的來源不同和導入位點的隨機性，極有可能產生基因缺失、錯碼等突變，使所表達的蛋白質產物的性狀、數量及在生物中的表達部位與期望值不符，導致轉基因食品的營養質量下降或無法被人體有效地吸收利用。人類是轉基因食品的直接或間接的消費者，而且是最終的消費者，因此公眾必然會對轉基因食品的安全性問題十分關注。因此，加強轉基因植物的安全評價，特別是食用安全評價具有十分重要的意義。

在轉基因生物食品安全評價中，目前采用的傳統方法都是將轉基因植物及其產品用于飼喂實驗動物，來觀察實驗動物各項生理指標的改變，以此評估轉基因生物的安全性。但是，由于轉基因生物在經過實驗動物消化道時面臨消化與吸收的問題，并不一定會進入實驗動物體內，因此很難得到明確的結論，這也是公眾對轉基因生物安全評價質疑較多的地方。因此，如何評價轉基因生物的潛在風險成為亟待解決的問題。

發明內容

本發明的目的是提供一種與轉基因植物外源Bt蛋白相互作用的人類蛋白ANKHD1。

為了實現本發明目的，本發明提供一種與轉基因植物外源Bt蛋白相互作用的人類蛋白ANKHD1，所述人類蛋白ANKHD1的氨基酸序列如SEQ?ID?No.1所示，或該序列經替換、缺失或添加一個或幾個氨基酸形成的具有同等功能的氨基酸序列。

所述人類蛋白ANKHD1為人類錨定蛋白重疊片段和KH結構域內含蛋白1（ANKHD1）（自命名為M11），由人的ANKHD1基因編碼，蛋白結構包括多個錨定蛋白重復結構域和一個KH結構域兩個部分，具有支架蛋白的作用。全基因轉錄時，與相鄰的下游基因EIF4EBP3通讀（readthrough）形成共轉錄本MASK-BP3，最終編碼一個融合蛋白，由MASK蛋白和不同的C-末端序列組成，前者占該融合蛋白的主要部分，后者的異同是由于下游基因EIF4EBP3的選擇性剪接的結果。

應當理解，本領域技術人員可根據本發明公開的氨基酸序列，在不影響其活性的前提下，取代、缺失和/或添加一個或幾個氨基酸，得到所述蛋白ANKHD1的突變序列。

其是利用酵母雙雜交的方法通過轉基因植物中外源蛋白對人的cDNA文庫進行篩選，獲得與外源蛋白相互作用的人類蛋白，并通過免疫共沉淀的方法對互作進行陽性驗證，從而篩選得到與轉基因植物中外源蛋白發生相互作用的人類蛋白。

本發明還提供編碼上述蛋白ANKHD1的基因，其核苷酸序列如SEQ?ID?No.2所示。

本發明還提供含有編碼上述蛋白ANKHD1的基因的載體。

本發明還提供含有編碼上述蛋白ANKHD1的基因的轉基因細胞系。

本發明還提供含有編碼上述蛋白ANKHD1的基因的工程菌。

本發明還提供上述蛋白ANKHD1在轉基因生物安全評價領域中Bt蛋白對人體潛在風險的預測中的應用，即如果外源Bt蛋白通過某種途徑進入人體內部，則會影響ANKHD1正常的生理功能，在研究轉基因植物安全時，可以將蛋白ANKHD1及其信號通路的下游蛋白作為監測指標。