[發(fā)明專利]一種熒光標(biāo)記金納米顆粒的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201310651856.0
• 申請(qǐng)日: 2013-12-05
• 公開（公告）號(hào): CN103611929A
• 公開（公告）日: 2014-03-05
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 孫紅霞;唐亞林;張素格
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國科學(xué)院化學(xué)研究所
• 主分類號(hào): B22F1/00
• 分類號(hào): B22F1/00;C09K11/06;B82Y40/00;B82Y30/00
• 代理公司: 北京紀(jì)凱知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11245
• 代理人: 關(guān)暢

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥領(lǐng)域，尤其涉及一種熒光標(biāo)記金納米顆粒的方法。

背景技術(shù)

納米金是指金的微小顆粒,其直徑在1～100nm，通常在水溶液中以膠體金的形態(tài)存在，具有高電子密度、介電特性和催化作用，能與多種生物大分子結(jié)合，且不影響其生物活性。目前最經(jīng)典的制備膠體金的方法是檸檬酸鈉還原法。根據(jù)還原劑的種類和濃度的不同,可以在實(shí)驗(yàn)室條件下制備出不同粒徑的膠體金,且方法簡單、原料價(jià)廉。

納米金在510-550nm可見光譜范圍內(nèi)有一吸收峰,吸收波長隨金顆粒直徑增大而增加。當(dāng)粒徑從小到大時(shí),表觀顏色依次呈現(xiàn)出淡橙黃色、葡萄酒紅色、深紅色和藍(lán)紫色變化。除這些獨(dú)特的顏色變化之外，金納米粒子還具有良好的生物相容性和無毒副作用。由此，納米金在近年來已經(jīng)被廣泛應(yīng)用于生物分子標(biāo)記和檢測(cè)、納米生物傳感器和納米生物芯片等技術(shù)。

在生物分子標(biāo)記技術(shù)中，蛋白質(zhì)等高分子與納米金顆粒因靜電吸附而形成牢固結(jié)合，由于金顆粒具有高電子密度的特性，在金標(biāo)蛋白結(jié)合處，在顯微鏡下可見黑褐色顆粒，當(dāng)這些標(biāo)記物在相應(yīng)的配體處大量聚集時(shí)，肉眼可見紅色或粉紅色斑點(diǎn)，因而用于定性或半定量的快速免疫檢測(cè)方法中。由于球形的納米金粒子對(duì)蛋白質(zhì)有很強(qiáng)的吸附功能，可以與葡萄球菌A蛋白、免疫球蛋白、毒素、糖蛋白、酶、抗生素、激素、牛血清白蛋白等非共價(jià)結(jié)合，因而在基礎(chǔ)研究和實(shí)驗(yàn)中成為非常有用的工具。

但是，金納米顆粒的定性或半定量檢測(cè)往往無法實(shí)現(xiàn)高靈敏檢測(cè)。在金納米顆粒表面標(biāo)記熒光探針是提高檢測(cè)靈敏度一個(gè)有效的手段。而金納米顆粒是一種優(yōu)良的熒光猝滅劑，與普通猝滅劑相比，納米金的Stern-Volmer猝滅常數(shù)高出幾個(gè)數(shù)量級(jí)，因此很難檢測(cè)到標(biāo)記分子的熒光，從而大大限制了金納米顆粒上標(biāo)記熒光探針的應(yīng)用。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種熒光標(biāo)記金納米顆粒的方法。

本發(fā)明提供的方法，為用G-四鏈體DNA分子將菁染料標(biāo)記在金納米顆粒表面，得到熒光標(biāo)記金納米顆粒；

所述G-四鏈體DNA分子為單鏈，其核苷酸序列為GGYGGZGGMGG，其中：Y、Z和M獨(dú)立地代表一個(gè)或多個(gè)任意堿基；

所述菁染料為式I所示的化合物，

其中：R₁為C₁-C₆的烷基、苯基或烷基（此處也是C₁-C₆）取代的苯基；

R₂、R₃、R₄和R₅獨(dú)立地選自H或C₁-C₆的烷基，或者R₂和R₃與它們所連接的碳原子一起形成5元至7元的環(huán)結(jié)構(gòu)，或者R₄和R₅與它們所連接的碳原子一起形成5元至7元的環(huán)結(jié)構(gòu)；

R₆和R₇為C₁-C₆烷基或者磺酸基取代的C₁-C₆烷基；

Y為反離子，根據(jù)R₆和R₇所帶電荷的不同而不同，若R₆和R₇為烷基，則Y為鹵素陰離子；若R₆和R₇只有一個(gè)帶有磺酸根，則無需Y作為反離子；若R₆和R₇均帶有磺酸根，則Y為三乙胺陽離子；

X₁，X₂獨(dú)立地選自C、O、S、Se或Te。

上述方法中，

所述C₁-C₆的烷基選自甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、叔丁基、戊基、異戊基、正己基或異己基；

所述5元至7元環(huán)結(jié)構(gòu)為含有或不含有N或S原子的飽和或不飽和環(huán)結(jié)構(gòu)；

所述Y選自氟、氯、溴、碘陰離子或三乙胺陽離子；

所述R₁選自甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、叔丁基、戊基、異戊基、正己基、異己基、苯基、甲基苯基或二甲基苯基；R₂、R₃、R₄和R₅獨(dú)立地選自甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、叔丁基、戊基、異戊基、正己基或異己基。