[發明專利]鏈霉菌幾丁質酶的分離純化方法

在審

• 申請號: 201310650637.0
• 申請日: 2013-12-06
• 公開（公告）號: CN103667218A
• 公開（公告）日: 2014-03-26
• 發明（設計）人: 段升華
• 申請（專利權）人: 中山奈德生物科技有限公司
• 主分類號: C12N9/42
• 分類號: C12N9/42
• 代理公司: 中山市銘洋專利商標事務所(普通合伙) 44286
• 代理人: 鄒常友

1.鏈霉菌幾丁質酶的分離純化方法，其特征在于：包括如下步驟：

（1）粗酶液的制備；

（2）離子交換層析；

（3）凝膠過濾。

2.根據權利要求1所述鏈霉菌幾丁質酶的分離純化方法，其特征在于：所述粗酶液的制備：用優化試驗篩選出的培養基培養鏈霉菌，在幾丁質酶活性達最高時取發酵液離心，上清液用真空抽濾，除去雜質收集濾液，向濾液中加入固體硫酸銨至飽和度為60%，4℃靜置過夜，再次離心收集沉淀，用緩沖液溶解沉淀，離心溶解液除去不溶物體，上清液裝于透析袋，經pH6.5?0.01～0.03mol/L的磷酸鹽緩沖液透析后，再用聚乙二醇濃縮得到粗酶液。

3.根據權利要求2所述鏈霉菌幾丁質酶的分離純化方法，其特征在于：所述培養基為：2%（w/V）的膠體幾丁質100ml/L，黃豆餅粉0.4wt%，K₂HPO₄1.0(g/L)，KH₂PO₄0.6(g/L)。

4.根據權利要求1所述鏈霉菌幾丁質酶的分離純化方法，其特征在于：所述離心條件為4℃，轉速8500～12000?rpm，時間10～15min。

5.根據權利要求1所述鏈霉菌幾丁質酶的分離純化方法，其特征在于：所述離子交換層析:?粗酶液經過聚乙二醇PEG20000?濃縮后，用0.01～0.03mol/L的磷酸鹽緩沖液平衡過夜，上樣于充分平衡后的DEAE?A-52?陰離子交換層析柱，用0.01～0.03mol/L的磷酸鹽緩沖液洗脫雜蛋白，在收集洗脫液的過程中，逐管用紫外分光光度計檢驗雜蛋白的洗脫情況，當基線開始走平后，改用含0-1mol/L?NaCl?的磷酸鹽緩沖液進行連續洗脫,?收集洗脫液。

6.根據權利要求5所述鏈霉菌幾丁質酶的分離純化方法，其特征在于：所所述洗脫條件為：流速35mL/h?；5mL/?管。

7.根據權利要求1所述鏈霉菌幾丁質酶的分離純化方法，其特征在于：所述凝膠過濾：用pH6.5?0.01～0.03mol/L的磷酸鹽緩沖液充分平衡的Sephadex?G-75凝膠過濾層析柱，上樣后，再用相同的緩沖液進行洗脫，收集有酶活性的部份。

8.根據權利要求7?所述的扁座殼孢菌幾丁質酶的分離純化方法，其特征在于：所述洗脫條件為：流速15-25?mL/h?，5mL/管。