[發明專利]一種基于3D培養體系的擴增造血干細胞的方法

有效

• 申請號: 201310648974.6
• 申請日: 2013-12-06
• 公開（公告）號: CN103740644A
• 公開（公告）日: 2014-04-23
• 發明（設計）人: 曾憲卓
• 申請（專利權）人: 曾憲卓
• 主分類號: C12N5/0789
• 分類號: C12N5/0789
• 代理公司: 北京東正專利代理事務所(普通合伙) 11312
• 代理人: 劉瑜冬

1.一種基于3D培養體系的造血干細胞擴增方法，其特征在于，該方法包括如下步驟：(1)將血液中分離出的造血干細胞懸液置入復合培養基中培養：復合培養基包括無血清干細胞基礎培養基、SIFE生長因子、血清替代物、纖維蛋白凝膠；

(2)將(1)的復合培養基置入低氧培養箱中，低氧培養箱維持的氧濃度為3～20％。

2.根據權利要求1所述基于3D培養體系的造血干細胞擴增方法，其特征在于，步驟(1)復合培養基中，造血干細胞懸液的體積分數為15％、血清替代物的體積分數為15％、纖維蛋白凝膠的體積分數為15-25％、SIFE生長因子包括干細胞因子、FMS樣酪氨酸激酶-3配體、促紅細胞生成素、白細胞介素-3、白細胞介素-6、粒細胞巨噬細胞集落刺激因子、粒細胞集落刺激因子，各成份在復合培養基中的終濃度依次為50～100ng/mL、25～40ng/mL、0.5～1U/mL、3～5ng/mL、3～5ng/mL、3～5ng/mL、3～5ng/mL，佘量為無血清干細胞基礎培養基。

3.根據權利要求1所述基于3D培養體系的造血干細胞擴增方法，其特征在于，步驟(1)纖維蛋白凝膠的制備方法為，①將氨基酸序列為mqaqqyqqqr?rkfaaaflaf?ifi?laavdta?eagkkekpek?kvkksdcgew?qwsvcvptsg?dcglgtregt?rtgaeckqtm?ktqrckipcn?wkkqfgaeck?yqfqawgecd?lntalktrtg的多肽與50-75mg凍干的纖維蛋白原偶聯；②配制2000KIU/mL抑肽酶，取配制好的抑肽酶1mL溶解多肽偶聯的凍干纖維蛋白原，即得溶液A，③將凝血酶加入40mmol/L?CaCl₂溶液中，配制出凝血酶濃度為250-400u/mL的溶液B；④將溶液A和溶液B混合，在底面積為0.25cm²模具中制作成為圓柱形的復合物，置37℃保溫1h，即得到纖維蛋白凝膠，4℃冰箱保存備用。

4.根據權利要求2所述基于3D培養體系的造血干細胞擴增方法，其特征在于，步驟(1)的30ul造血干細胞懸液中含有的造血干細胞個數為1-2×10⁵個。