[發(fā)明專利]表面展示花生過敏原的重組乳酸乳球菌的制備方法及其應用

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310646560.X
• 申請日: 2013-12-04
• 公開（公告）號: CN103614331A
• 公開（公告）日: 2014-03-05
• 發(fā)明（設計）人: 陳衛(wèi);張秋香;任晟誠;王剛;田豐偉;劉小鳴;趙國忠;趙建新;張灝;郭敏
• 申請（專利權）人: 江南大學
• 主分類號: C12N1/21
• 分類號: C12N1/21;C12N15/74;A61K39/35;A61P37/08;C12R1/01
• 代理公司: 北京君智知識產權代理事務所 11305
• 代理人: 呂世靜

【技術領域】

本發(fā)明涉及表面展示表達花生過敏原Arah2的重組乳酸乳球菌菌株，其構建方法及應用，屬于生物工程技術領域。

【背景技術】

花生過敏是最嚴重而且常見的食物過敏反應之一，具有發(fā)病快、致死率高及

終生性等特點。近些年來，花生過敏的發(fā)病率在全球范圍內有逐年上升的趨勢。在美國，有1.1%的人口對花生過敏，其發(fā)病率在1997年至2002年間增長了近一倍。誘導特異性口服耐受，即在一段時間內通過給予患者逐漸增加劑量的過敏原以誘導患者對此種食物抗原產生免疫耐受的治療方法，是目前比較有效的花生過敏治療方法。

高純度過敏原的獲取是進行免疫耐受性誘導的前提和基礎。花生過敏原共有11種，其中Arah2是一種分子量為17-19KDa的糖蛋白，可被超過90%的患者血清中IgE特異性識別，是目前研究最廣泛也是最重要的花生過敏原之一。近些年來，分子生物學技術的發(fā)展使利用生物合成方法獲取高純度的過敏原成為可能。目前已有國內外研究者利用不同表達系統(tǒng)生產花生過敏原，如陶愛林等（2012）在專利《一種重組花生過敏原與突變體及其制備方法和應用》中介紹了利用大腸桿菌表達系統(tǒng)制備一種重組花生過敏原與突變體的方法；KatrinLehmann等已成功利用大腸桿菌重組表達具有良好免疫原性的Arah2蛋白（KatrinLehmann,etal.High-yieldexpressioninEscherichiacoli,purification,andcharacterizationofproperlyfoldedmajorpeanutallergenArah2.ProteinExpressionand?Purification,2003,31:250–259）。但大腸桿菌可產生結構復雜、種類繁多的內毒素，且表達產物的后續(xù)純化成本高昂，限制了大腸桿菌原核表達系統(tǒng)的臨床應用。

乳酸乳球菌長期以來被廣泛應用于酸奶、奶酪、泡菜等傳統(tǒng)食品的生產中，是公認安全的微生物。利用乳酸乳球菌表達外源蛋白可無需純化連同菌體一起服用，同時利用乳酸乳球菌作為表達載體的黏膜疫苗可有效誘導機體產生免疫反應和免疫耐受。已有研究表明，利用宿主細胞表面展示技術表達外源抗原或治療性蛋白，所制備的乳酸乳球菌粘膜疫苗可有效激發(fā)機體保護性的免疫反應。Xin等研究者將HIV病毒包膜蛋白的V2-V4區(qū)片段錨定在乳酸乳球菌細胞表面進行展示表達，用此重組菌口服免疫小鼠可刺激機體產生高水平抗HIV的特異性血清IgG和糞便IgA抗體，使小鼠卵巢中HIV病毒載量降低350倍（Xin,etal.ImmunogenicityandprotectiveefficacyoforallyadministeredrecombinantLactococcuslactisexpressingsurface-boundHIVEnv.Blood,2003,102:223-228）。因此，我們利用乳酸乳球菌（Lactococcuslactis）作為粘膜疫苗呈遞載體，將花生過敏原Arah2在L.lactis細胞表面進行展示表達，所構建的重組乳酸乳球菌在醫(yī)藥工業(yè)等領域具有廣闊的應用前景。

【發(fā)明內容】